WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |

Методические указания Материал для исследования: испражнения больного, рвотные массы, вода, пищевые продукты; при постмортальной диагностике: отрезкитонкой кишкии желчный пузырь с частью печени. При необходимости хранения материал помещают в транспортную среду (буферный солевой раствор с глицерином). Для длительного сохранения рекомендуется полоску фильтровальной бумаги, смоченную в жидких испражнениях, поместить в герметически закрытый пластиковый контейнер - для предохранения от высыхания. Таким образом возбудитель сохраняется в материале до 5 нед.

Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого материала готовят мазки окрашивают их по методу Грама и водным фуксином. Кроме того, из, нативного материала готовят препарат "висячая" капля, в котором определяют наличие подвижных вибрионов при темнопольной или фазово-контрастной микроскопии. Обнаружение в мазках большого количества грамотрицательных, слегка изогнутых палочек (длиной от 1,5 до 3 мкм) и активно-подвижных вибрионов в препарате "висячая" капля позволяет дать первый предварительный положительный ответ.

Бактериологическое исследование. Материал засевают в различные жидкие и плотные элективные среды, в частности во флаконы со щелочной пептонной водой (1% с теллуритом) и на чашки со щелочным питательным агаром. Посевы на пептонной воде инкубируют при 37 °С в течение 5-6 ч, на чашках – 10-12 ч. Из голубоватой пленки, образующейся напептонной воде, или из ее поверхностного слоя делают мазкиипрепараты "раздавленная" и "висячая" капля. Этот же материал используют для постановкиреакции агглютинации на стекле со специфической противохолерной О1-сывороткой. Часть пептонной воды переносят в другую пробирку для постановкинитрозоиндоловой пробы. Для этого добавляют туда же несколько капель серной кислоты. В положительном случае появляется розовое окрашивание вследствие образования нитрозоиндола под влиянием холерного вибриона Независимо от результатов исследования.

делают пересев на вторую пептонную воду. Наличие грамотрицательных вибрионов, агглютини-рующихся О1-сывороткой, позволяет дать второй предварительный ответ. Независимо от полученных результатов продолжают исследование, как показано на схеме 7.

Выделение чистой культуры и ее идентификацию проводят по 5-однотипным колониям, выросшим на щелочном агаре. Для ускорения хода анализа ставят развернутую реакцию агглютинации с бактериальной суспензией, приготовленной из колоний. Для этого агглютинирующую О1-сыворотку разводят в пробирках до титра пептонной водой (в объеме 0,5 мл). Затем в каждую пробирку вносят 1-2 капли суспензии бактерий. Результат реакции агглютинации учитывают после 3-4-часовой инкубации при 37 °С.

Реакция Фогеса-Проскауэра: вибрионы выращивают в глюкозофосфатном бульоне, затем добавляют реактив альфа-нафтол в растворе щелочи; при наличии ацетилметилкарбиноланаблюдается рубиново-красное окрашивание среды.

Гексаминовый тест: культуру выращивают на бульоне с глюкозой, гексамином (уротропином) и индикатором бромтимоловым синим. В положительном случае через 6-8 ч наблюдается изменение зеленого цвета среды в желтый.

Таким образом, идентификацию культур проводят в три этапа 1) :

устанавливают их принадлежность к роду Vibrio; 2) дифференцируют их от холероподобных вибрионов в реакции агглютинации с O1-сывороткой, по чувствительности к специфическому фагу идругими тестами; 3) определяют видовые признаки культур. Окончательное заключение о выделении и дифференцировании холерных вибрионов дают через 36-48 ч на основании комплексного изучения основных биологических признаков возбудителя.

Трудности при оценке результатов бактериологического исследования встречаются при выделении атипичных холерных вибрионов ив первую очередь не агтлютинирующихся холерной O1-сывороткой (НАГ-вибрионы). НАГвибрионы могут лизироваться одним из специфических холерных фагов и обладать другими свойствами, сходными с холерными вибрионами.

Идентификацию культуры проводят на основании определения чувствительности вибрионов к холерному фагу, агглютинабельности противохолерной О1-сывороткой итиповыми агглютинирующими сыворотками Инаба и Огава их гемолитических и биохимических свойств (оксидазная, активность декарбоксилазы аминокислот, ферментация углеводов, образование ацетилметилкарбинолаидр.).

Экспресс-методы диагностики: иммобилизация вибрионов холерными сыворотками и типовыми холерными фагами. Каплииспражнений илиматериала с поверхности пептонной воды обрабатывают холерной O1-сывороткой, типовыми сыворотками Огаваи Инаба илитиповыми холерными фагами. Готовят из них препараты "раздавленная" капля, которые исследуют с помощью темнопольной и фазово-контрастной микроскопии. В положительном случае через 3-5 мин движение вибрионов прекращается.

Иммунохимические исследования. Применяют метод прямой ИФ. Мазкииз исследуемого материала обрабатывают флюоресцирующей противохолерной сывороткой и исследуют в люминесцентном микроскопе. Положительным результатом считается обнаружение в препарате даже единичных вибрионов с ярким желто-зеленым свечением в виде блестящего ободкапо периферии клетки.

Положительный результат можно получить через 1-2 ч после начала исследования при концентрации вибрионов не менее 106 клеток в 1 мл, поэтому рекомендуется предварительное подращивание материалана питательных средах.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. В случае обнаружения соответствующих молекул ДНК в исследуемом материале в ходе в результате проведения ПЦР-анализа можно поставить предварительный диагноз.



Серодиагностика. Выявление антител к возбудителю является вспомогательным и применяется для ретроспективной диагностики холеры, выявления вибрионосителей и оценки напряженности постинфекционного и поствакцинального иммунитета. Для этого обычно ставят реакцию агглютинации илиРНГА, диагностический титр антител в этих реакциях 1:80-1:320, а также определяют вибриоцидные антителав реакции лизиса.

Диагностика носительства Во время вспышки холеры проводят массовое обследование на носительство V.cholerae.

Материал для исследования: ректальные мазки (фекалии, взятые тампоном из прямой кишки).

Бактериологическое исследование. Посев материала от обследуемых наобогатительную среду с О1-агглютинирующей диагностической сывороткой. В положительных случаях через 3-4 ч начинается выпадение хлопьев в результате агглютинации размножившихся вибрионов. При обнаружении в осадке грамотрицательных подвижных вибрионов каждый из 10 пациентов обследуется индивидуально.

Схема 7. Микробиологическое исследование при холере Лабораторная диагностика пищевых токсикоинфекций, интоксикаций бактериальной природы Задания для выполнения лабораторной работы 1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций. Описать характер колоний, выросших на чашках с дифференциально-диагностической средой после посева испражнений больного и остатков пищи – возможных источников пищевой токсоинфекции.

2. Отметить результаты изучения биохимических свойств исследуемой культуры сальмонелл по ранее засеяному «пестрому» ряду. Сделать заключение наосновании полученных данных.

3. Диагностикаботулизма:

а) указать материал для исследования;

б) проанализировать результаты РНГА для обнаружения ботулотоксина в сыворотке крови больного (реакция Бойдена). Дать заключение.

Методические указания Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций, вызванных Еscherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp.

Материал для исследования: фекалии, рвотные массы, промывные воды желудка больного, остатки пищевых продуктов - возможные источники и факторы передачи инфекции.

Бактериологическое исследование. Производят путем посеваматериалана дифференциально-диагностические и элективные среды (Эндо, висмут-сульфит агар идр.) для выделения чистой культуры сальмонелл иэшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным питательным агаром для выявления бактерий родаРroteus. После инкубации посевов при 37 °С в течение 20-24 ч отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой иналичие "ползучего" роста, характерного для Рroteus spp., в пробирке со скошенным питательным агаром. Подозрительные колонии пересевают на скошенный питательный агар для получения чистых культур и одновременно ставят с ними ориентировочную реакцию агглютинации на стекле, используя смеси диагностических сывороток. На следующий день с чистой культурой ставят развернутую реакцию агглютинации с соответствующей монорецепторной сывороткой иделают посев на среды "пестрого" ряда При выделении одного и.

того же серовара сальмонелл или эшерихий из организма больных людей и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой токсикоинфекции - источнике заболевания. При наличии "ползучего" роста на скошенном питательном агаре из конденсационной воды петлей берут материал для приготовления препарата "висячая" капля с целью установления подвижности и для мазка, который окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Затем выделяют чистую культуру, определяют биохимические и другие признаки и устанавливают вид: Р.vulgaris, P.mirabilis, P.morganii и P.rettgeri.

Оценкаролиусловно-патогенных микроорганизмов в этиологии пищевых токсикоинфекций должнабыть строго аргументирована: а) бактериологическим, серологическим, эпидемиологическим и клиническим исключением сальмонеллезов, дизентерии, холеры; б) выделением идентичных штаммов условно-патогенных бактерий из рвотных масс, промывных вод желудка, испражнений, продуктов.

Микробиологическая диагностика стафилококковых пищевых интоксикаций Материал для исследования: рвотные массы, промывные воды желудка, подозрительные пищевые продукты.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимическая диагностика основана наобнаружении энтеротоксина в исследуемом материале. Энтеротоксин Staphylococcus spp. экстрагируют изотоническим раствором хлориданатрия, затем определяют его присутствие и серологическую специфичность реакцией преципитации в геле с иммунными антитоксическими сыворотками А, В, С.

Используют также латекс-агглютинацию, ИФА, РИА и др.

Бактериологическое исследование. С целью выделения чистой культуры стафилококкаисследуемый материал, который может содержать жизнеспособные бактерии, засевают в чашки с ЖСА. Полученные по схеме чистые культуры проверяют на способность продуцировать энтеротоксины. Для эпидемиологического анализа массовых стафилококковых интоксикаций проводят фаготипирование выделенных культур с помощью набора стафилококковых фагов.

Биопроба. Для обнаружения энтеротоксина можно использовать биопробу - скормить изучаемый материал котятам-сосункам, у которых стафилококковый энтеротоксин вызывает рвоту и понос через 30-60 мин после скармливания.

Микробиологическая диагностика ботулизма Материал для исследования: сыворотка крови, моча, испражнения, промывные воды желудка, остаткипищи илиподозреваемые продукты (колбасы, мясные, рыбные, фруктовые, овощные консервы и др.).





Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимическая диагностика основана на обнаружении ботулотоксина в исследуемом материале. С этой целью ставят реакцию Бойдена - РИГА с эритроцитами, нагруженными моновалентными антитоксическими противоботулиническими сыворотками типов А, В, Е. В качестве контроля используют нормальную сыворотку крови. Для выявления ботулотоксина могут быть использованы также ИФА и другие чувствительные серологические реакции.

Биопроба. Для обнаружения ботулотоксина в пищевых продуктах и определения токсигенности С.botulinum можно провести реакцию нейтрализации токсина на белых мышах. Для определения серотипа токсина реакцию ставят с моновалентными сыворотками типов А, В, Е. При нейтрализации токсина гемолитической антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.

Диагностические, профилактические и лечебные препараты Стафилококковые бактериофаги (международный набор). Применяют для фаготипирования стафилококков с целью эпидемиологического анализа пищевой интоксикации.

Противоботулинические сыворотки. Получены из крови лошадей, гипериммунизированных ботулиническими анатоксинами. Очищены и концентрированы методом диаферм-3. Для лечебно-профилактических целей готовят противоботулинические сыворотки четырех типов: А, В, Е, F.

Моновалентные сывороткиперечисленных типов используют в диагностических целях для определения серотипатоксина в исследуемом материале.

Ботулинический трианатоксин адсорбированный очищенный.

Экзотоксины С.botulinum (серотипы А, В и Е) обезвреживают формалином при нагревании, а затем очищают от балластных веществ, концентрируют и адсорбируют на гидрате оксидаалюминия. Применяют для проведения плановой активной иммунизации против ботулизма юношей допризывного возраста (лет).

Противохолерная агглютинирующая O-сыворотка, типовые сыворотки Огава и Инаба. Получены из крови кроликов, иммунизированных холерными вибрионами. Применяют для серологической идентификации и типирования холерных вибрионов в реакции агглютинации.

Холерные фаги. Типовые холерные фагиприменяют для идентификации и типирования холерных вибрионов. Поливалентный холерный бактериофаг используют для лечебно-профилактических целей.

Холерная вакцина. Взвесь убитых холерных вибрионов применяют для активной иммунизации против холеры. Готовится из чистых культур V.cholerae O1 биоваров Е1-tor и asiatici серо-типов Инаба и Огава.

Холероген-анатоксин. Обезвреженный холерный токсин. Применяют для специфической профилактики холеры (создание активного специфического антитоксического иммунитета).

Антибиотики. Могут быть использованы все препараты, действующие на соответствующие бактерии. Вместе с тем надо учитывать, что средивозбудителей достаточно широко распространены устойчивые варианты. Для большинства грамотрицательных возбудителей кишечных инфекций широко используют тетрациклины, ампициллин, цефалоспорины 2-4-го поколений, хлорамфеникол, фторхинолоны.

ВОЗБУДИТЕЛИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ И ДРУГИХ ВОЗДУШНО-КАПЕЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ Возбудителиинфекций, передающихся воздушно-капельным путем (табл.

9), относятся к разным семействам, родам и видам, которые существенно отличаются друг от друга по морфологии, культуральным и биохимическим свойствам, антигенной структуре. Респираторные инфекции разной этиологии клиническидиагностируются как острые респираторные заболевания (ОРЗ) илипневмонии. Их возбудителимогут быть идентифицированы только с помощью микробиологического исследования. В этиологии ОРЗ и пневмоний важную роль играют сложные микробные ассоциации, преимущественно бактериальные и вирусно-бактериальные.

Таблица 9. Возбудителибактериальныхвоздушно-капельных инфекций Наименование возбудителя Заболевание илисиндром Staphylococcus aureus (+) А Пневмония Streptococcus pneumonia (+) А То же S. pyogenes (+) А -//- Klebsiella pneumonia (-) А -//- Mycoplasma pneumonia А -//- Chlamydia psittaci -//- Coxiella burnetii Q-лихорадка (пневмония) Escherichia coli (-) А Пневмония (аспирационная) Enterobacter spp. (-) А То же Proteus spp. (-) А -//- Bacteroides spp. (-) Ан Пневмония, абсцесс легких Peptococcus spp. (+) Ан То же Vellonella spp. (-) Ан Пневмония, синусит, отит Haemophilus influenzae (-) А Пневмония, бронхит Bordetella pertussis (-) А Коклюш Bordetella parapertussis (-) А Паракоклюш Corynebacterium diphtheriae (+) А Дифтерия Mycobacterium tuberculosis (к/у) А Туберкулез легких Actinomyces bovis (+) Ан Актиномикоз легких Neisseria meningitides (-) А Менингококковая инфекция Условные обозначения: (+) – грамположительные, (-) – грамотрицательные, (к/у) – кислотоустойчивые, А – аэробы, Ан – анаэробы.

Другие бактерии вызывают более избирательные поражения. Так, Вordetella pertussis, как правило, локализуется в эпителии дыхательных путей.

Соrynebacterium diphteriae вызывают патологический процесс главным образом в зеве, кроме того, возникают системные поражения, связанные с токсинемией.

Менингококкилокализуются в носоглотке ивызывают фарингиты, назофагиты, а проникая в мозговые оболочки и кровь, - менингит и сепсис. К бактериям, вызывающим специфические поражения респираторного тракта, относятся возбудителитуберкулеза и актиномикоза. Вместе с тем эти бактерии поражают также и другие органы (кишечник, печень, кости, суставы и др.). Вызванные всеми упомянутыми бактериями заболевания существенно различаются по клинической картине и патогенезу.

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.