WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 8 |

К третьей группе относятся большинство сероваров, не имеющих специфических хозяев и способных инфицировать как человека, так иживотных. По клинической классификации сальмонеллы подразделяют на возбудителей брюшного тифа (биовар typhi) и паратифов (биовары раratyphi А, С и schotmulleri) и возбудителей сальмонеллезов, включающих все остальные биовары сальмонелл, патогенных для человека. Большинство возбудителей сальмонеллезов относится к третьей группе по эпидемиологической классификации.

Задания для выполнения лабораторной работы 1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

2. Диагностикабрюшного тифа и паратифов.

2.1. Бактериологическая диагностика:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посеваисследуемого материалана среду Раппопорт;

в) учесть результаты пересева бактерий со среды Раппопорт на среду Эндо. Описать и зарисовать колонии, выросшие на среде Эндо, и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;

г) учесть результаты пересеваподозрительных колоний со среды Эндо на среду Ресселя;

д) учесть результаты идентификации выделенной чистой культуры по биохимическим свойствам;

е) сделать вывод инаметить план дальнейшего исследования.

2.2. Серодиагностика. Проанализировать результаты реакции Видаля.

3. Бактериологическая диагностикасальмонеллезов:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посева исследуемого материала на висмут-сульфит агар. Описать и зарисовать колонии и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;

в) учесть результаты пересеваподозрительных колоний на среду Ресселя;

г) учесть результаты идентификации выделенной чистой культуры по биохимическим свойствам;

д) сделать вывод инаметить план дальнейшего исследования.

4. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилактическими препаратами.

Методические указания Микробиологическая диагностика брюшноготифа и паратифов Материал для исследования: исходя из особенностей патогенеза брюшного тифа, на 1-й неделе заболевания, в период бактериемии, возбудителей выделяют из крови (получение гемокультуры), со 2-й неделизаболевания - из испражнений (получение копрокультуры), мочи или желчи. Антитела в сыворотке накапливаются при брюшном тифе в конце 1-й неделизаболевания.

Бактериологическое исследование (схема 6).

Получение гемокультуры. В 1-й день из локтевой вены больного берут 5-мл крови и засевают в колбу с 50-100 мл селективной среды Раппопорт, содержащей желчный бульон (для подавления роста других бактерий), глюкозу, индикатор Андреде и поплавок для обнаружения газа. Указанные соотношения крови и среды необходимы для подавления бактерицидного действия белков крови. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18-20 ч. На 2-й день при росте сальмонелл наблюдается помутнение и изменение цвета среды. При росте паратифозных бактерий (биовары ра ratyphi А, С и schotmulleri) наряду с указанными изменениями появляются пузырькигаза в поплавке. Для ускорения ответа из среды Раппопорт делают мазки и препараты "висячая" капля. При наличии чистой культуры грамотрицательных подвижных палочек и изменении цвета среды (или наличии газа) дают первый предварительный ответ. Затем культуру из среды Раппопорт пересевают в пробирку со средой Ресселя, полагая при этом, что из крови выделена чистая культураи можно сразу приступить кее идентификации. Одновременно со среды Раппопорт делают посевы на среду Эндо для получения изолированных колоний с целью проверкичистоты выделенной культуры.

На 3-й день отмечают ферментацию глюкозы на среде Ресселя иставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле. На основании полученных данных дают второй предварительный ответ. Для дальнейшего исследования отбирают несколько бесцветных колоний со среды Эндо ипересевают их в среду Ресселя или скошенный питательный агар (для контроля полученных результатов). Чистую культуру пересевают на среды "пестрого" ряда и серотипируют в реакции агглютинации на стекле со смесью групповых сывороток, а затем с адсорбированными монорецепторными О- и Н сальмонеллезными сыворотками. Окончательный диагноз устанавливают на основании биохимических (табл. 5) и антигенных свойств. Биохимические признаки (развернутый "пестрый" ряд) позволяют дифференцировать сальмонеллы от схожих с ними энтеробактерий: Citrobacter, Hafnia (табл. 6).

Выделенную чистую культуру бактерий используют для определения чувствительности кантимикробным препаратам.

Фаготипирование. С помощью наборастандартных Vi-фагов определяют до 78 фаготипов S. enterica биовараtурhi. При этом необходимым условием является наличие в культуре Vi-антигена. Культуры S. enterica биовара раratyphi В (schotmulleri) дифференцируются на 11 фаготипов иподтипов.

Таблица 5. Биохимические свойствасальмонелл - возбудителей брюшного тифа и паратифов Биовар Ферментация Образование S. епtеriса лактозы глюкозы мальтозы сахарозы маннита H2S NH3 индола typhi - К К - К + - - раratyphi А - КГ КГ - КГ - - - schotmulleri - КГ КГ - КГ + + - Условные обозначения: (К) - образование кислоты; (КГ) - образование кислоты и газа;

(+) - обнаружение признака; (-) - отсутствие признака.

Таблица 6. Дифференциация сальмонелл и других энтеробактерий по биохимическим признакам Лизин- Ферментация углеводов декар- дуль- сор- кси- рам- сали 4% ГалакРод бокси- цита бита лозы нозы цина лактозы тозилаза даза Salmonella +- К (-) К К К - - - Citrobacter - К (-) К К К К (+-) К (+-) К Hafnia + - - К К К (+-) - К Условные обозначения: (+) - положительная реакция; (-) - отрицательная реакция; (+-) - вариабельная реакция; К - образование кислоты; К (-) - образование кислоты (редко);



К (+-) - образование кислоты (вариабельно).

Получение копрокультуры. Испражнения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо или Левина) или элективные среды обогащения (Мюллера, селенитовая иливисмут-сульфит агар). Для посева петлю фекалий вносят в пробирку с изотоническим раствором хлориданатрия и готовят суспензию. После оседания крупных комочков суспензию петлей наносят на поверхность агаровой среды - на одну половину чашки. Материал тщательно растирают шпателем по одной, а затем по другой половине чашкидля получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18-20 ч. На 2-й день изучают характер колоний, выросших на чашках, пересевают 2-3 бесцветные колонии (со среды Эндо илиЛевина) иликолонии черного цвета (висмут-сульфит агар) на среду Ресселя ив пробиркисо скошенным питательным агаром. При отсутствии подозрительных колоний на чашках делают высевы из среды Мюллера или селенитовой среды на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Для ускорения ответа ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с материалом, взятым из бесцветной колонии. Далее поступают так же, как и идентификации гемокультуры.

при Экспресс-методы диагностики. Материал, полученный из очага инфекции, в молекулярно-биологических исследованиях используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.

Серодиагностика. В лабораторной практике широко применяют развернутую реакцию агглютинации Видаля, основанную на обнаружении в сыворотке крови людей антител - агглютининов, которые появляются в конце 1-й - начале 2-й недели заболевания. Реакцию ставят одновременно с четырьмя антигенами: О- и Н -брюшнотифозными, А - и В-паратифозными диагностикумами. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяют для установления стадии болезни, так как содержание О- и Н -антител в разные ее периоды неодинаково, О-антитела появляются на 1-й неделе, накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н -антителапоявляются в разгар заболевания, накапливаются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени. У людей, вакцинированных против брюшного тифа и паратифов, также наблюдается положительная реакция Видаля, причем в довольно высоком титре, поэтому "инфекционный Видаль" удается отличить от "прививочного" только по нарастанию титраагглютининов у больных в процессе заболевания. Реакцию Видаля ставят в четырех рядах пробирокпо 7 пробирокв каждом ряду, из которых 5 опытных и 2 контрольные.

Для контроля каждого диагностикума в пробиркивносят по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия, в который добавляют 2 капли диагностикума. В контрольной пробирке с 1 мл сыворотки(без диагностикума) не должно быть хлопьев. При спонтанной агглютинации реакция не учитывается.

Диагностический титр реакции Видаля равен 1:200. Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию непрямой Vi-гемагглютинации, с помощью которой в сыворотке крови людей определяют присутствие антител к Vi -антигену. В качестве антигена используют эритроцитарный Vi-диагностикум, представляющий собой взвесь эритроцитов человека I(0) группы, обработанных формалином и сенсибилизированных Vi-антигеном S. enterica биовара typhi.

Готовят разведения испытуемой сывороткиот 1:10 до 1:1280. При положительной реакции эритроциты покрывают дно пробирки в виде диска с зазубренными краями, а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательной реакции, так же как ив контроле, эритроциты осаждаются на дно пробиркии имеют вид дискас ровными краями ("пуговки"). Диагностическое значение имеет титр пассивной Vi-гемагглютинации, начиная с 1:40 и выше. Всех лиц, сыворотка крови у которых дает положительный результат в РНГА с эритроцитарным Viдиагностикумом, рассматривают как подозрительных на носительство S. enterica биовараtyphi и подвергают многократному бактериологическому обследованию.

Схема 6. Микробиологическое исследование при брю шном тифе и паратифе Микробиологическая диагностика сальмонеллезов Материал для исследования: испражнения, при генерализованной форме - кровь.

Микробиологическая диагностика сальмонеллезов принципиально не отличается от диагностики брюшного тифа и паратифов. Серодиагностика не применяется по причине большого числа сероваров возбудителей. Важнейшие биохимические признакирядасальмонелл представлены в таблице 7.

Таблица 7. Биохимические свойствасальмонелл Ферментация Образование Вид индола H2S S.typhimurium + - + +- - + +- - + В S.derby + - + + - + + - + S.heiderberg + - + + +- + + - + С S.choleraesuis + - + + - +- + - +- S.newport + - + + - + + - + D S.enteritidis + - + + - +- + +- + E S.anatum + - + + - + + - + Условные обозначения: (+) - положительная реакция; (-) - отрицательная реакция; (+-) – большее число штаммов дает положительную реакцию.

Микробиологическая диагностика кишечногодисбактериоза Материал для исследования: фекалии.

Бактериоскопическое исследование. Имеет ориентировочное значение.

При резко выраженном дисбактериозе в мазках преобладают микроорганизмы определенных видов (например, дрожжеподобные грибы, стафилококкиидр.) на фоне существенного уменьшения грамотрицательной микрофлоры.





Бактериологическое исследование. Проводится количественное исследование состава микрофлоры кишечника. Для этого из исследуемого материалаготовят разведения 10-2, 10-4, 10-6 и т.д. Первичные посевы по 0,1 мл каждого разведения производят параллельно на несколько питательных сред (Эндо, кровяной агар, ЖСА, агар Сабуро и др.) и инкубируют при 37 °С.

Подсчитывают число выросших колоний и определяют число КОЕ в 1г материала Проводят отсев 2-3 колоний каждого вида для выделения и.

идентификации чистых культур микроорганизмов.

Для обнаружения анаэробных Bifidobacterium spp. делают мерные посевы материалав разведениях 10-7 и выше в пробиркис 13-15 мл модифицированной среды Блаурокка, в состав которой входит печеночный бульон, пептон - 1%, лактоза - 1%, хлорид натрия - 0,5%, цистин - 0,01%, агар-агар - 0,75%, твин-80 - 0,1%. При росте Bifidobacterium spp. через 24-48 ч происходит помутнение всей среды с образованием тяжей или отдельных колоний. Готовят мазки и л а к т о зы к с и л о зы м а н н и т а р а м н о зы г л ю к о зы с а х а р о зы д ул ь ци т а Г р уп п а окрашивают по методу Грама. Выделение чистых культур Bifidobacterium spp. является весьма трудоемким и практическинеобязательным.

При необходимости идентификацию представителей рода осуществляют по биохимическим свойствам.

Для оценкирезультатов бактериологического исследования сопоставляют полученные данные с количественным содержанием микроорганизмов в норме.

Ориентировочные критерии нормальной микрофлоры толстой кишки представлены в табл. 8.

Таблица 8. Критерии нормы кишечной флоры Микроорганизмы Норма Патогенные микробы сем. Enterobacteriaceae Общее количество Е.соli, млн/г 300-Е.соli со слабовыраженными ферментативными свойствами, % До Е.соli с гемолитическими свойствами, % Нет Энтеробактерии (лактозоотрицательные и лактозополо- До жительные): Hafnia, Aerobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia Кокковые формы, % До Гемолитический стафилококк по отношению ко всем кокковым Нет формам, % Bifidobacterium spp. (рост при посеве разведения) 10 и выше Бактерии родаProteus Нет Грибы родаCandida Нет При кишечном дисбактериозе происходит значительное снижение облигатной анаэробной микрофлоры, и в первую очередь Bifidobacterium spp., а также увеличение аэробных видов, в частности Е.соli, содержание которых может превышать 1011 микробных клеток в 1 г испражнений. Увеличивается частота обнаружения штаммов Е.соli со слабой ферментацией лактозы и имеющих гемолитические свойства (до 30-40%), гемолитических и негемолитических стафилококков, бактерий родаProteus, грибов родаCandida (до 15-16%). У лиц с дисбактериозами более часто обнаруживают лактозоотрицательные и лактозоположительные энтеробактерии, относящиеся кродам Hafnia, Aerobacter, Citrobacter. Для микроорганизмов, в норме отсутствующих в испражнениях или имеющихся в небольшом количестве, показателем дисбактериоза будет содержание их 105-106 и выше КОЕ в 1 г материала Для окончательного.

заключения о кишечном дисбактериозе важное значение имеет повторное его выявление в динамике обследования больного.

Диагностические, профилактические и лечебные препараты Сальмонеллезные групповые, адсорбированные и монорецепторные О- и Н-агглютинирующие диагностические сыворотки. Получают так же, как и другие диагностические сыворотки. Применяют для серотипирования сальмонелл в реакции агглютинации.

Сальмонеллезные О- и Н- монодиагностикумы. Представляют собой взвеси сальмонелл, убитых нагреванием (О-диагностикумы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы). Применяют для серодиагностики брюшного тифа в реакции Видаля.

Типовые сальмонеллезные бактериофаги. Применяют для фаготипирования сальмонелл.

Брюшнотифозная моновакцина и брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном. Применяют для специфической активной профилактикибрюшного тифа.

Поливалентный брюшнотифозный бактериофаг. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактикибрюшного тифа.

Коли-бактерин. Содержит лиофильно высушенные живые клетки Е.соli штамма М17, обладающего выраженными антагонистическими свойствами в отношении рядапатогенных кишечных бактерий. Применяют для нормализации кишечной микрофлоры при дисбактериозе и лечении дизентерии у детей.

Бифидумбактерин. Содержит лиофильно высушенную взвесь живых клеток В. bifidum. Применяют для лечения хронических кишечных инфекций невыясненной этиологии у детей и дизентерии.

Бификол. Содержит смесь высушенных живых бактерий Е.соli штамма Ми В. bifidum. Показания к применению те же.

Лактобактерин. Выпускается в виде таблеток и содержит продукты жизнедеятельности лактобактерий. Применяют для лечения дисбактериозов.

Антибиотики: сульфаниламиды, полусинтетические пенициллины, цефалоспорины 2-4-го поколения, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолоны, полимиксин.

Лабораторная диагностика холеры Задания для выполнения лабораторной работы 1. Указать материал для исследования.

2. Бактериологическая диагностикахолеры.

а) изучить морфологические и тинкториальные свойства:

микроскопировать готовые мазкииз исследуемой культуры больного;

б) изучить антигенные свойства отметить результаты развернутой :

реакции агглютинации с диагностической O1-сывороткой;

в) отметить наличие или отсутствие роста исследуемой культуры на среде с полимиксином ирезультаты гексаминового теста. Дать заключение по проведенным исследованиям.

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 8 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.