WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 8 |

Бактериоскопическое исследование. Проводится путем микроскопии мазков, приготовленных из отечной жидкости или некротизированной ткани.

Наличие в препаратах крупных (1-1,5 3-10 мкм) грамположительных палочек, часть из которых (Сl. рerfringens) образуют капсулу, позволяет поставить предварительный диагноз.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал вносят в несколько пробироксо средой Китта-Тароцци, железосульфитным агаром (среда Вильсона-Блера) и молоком. Часть пробирок прогревают при 80 °С в течение мин для уничтожения неспорообразующих бактерий. Посевы инкубируют в обычном термостате при 37 °С. Сl. рerfringens растет в глубине среды. В молоке уже через 3-4 ч после посева образуется губкообразный сгусток, содержащий пузырькигаза и отделившуюся прозрачную жидкость. На следующие суткина среде Китта-Тароцци отмечается помутнение и газообразование, а на железосульфитном агаре несколько позднее появляются черные колонии в глубине агарового столбика. Для получения чистой культуры делают пересевы на сахарный кровяной агар в чашки Петри, которые инкубируют в строго анаэробных условиях при 37 °С в течение 3-4 дней. Выросшие колонии пересевают в пробирки со средой Китта-Тароцци. Идентификацию чистой культуры производят наосновании признаков, перечисленных в табл.3.

Экспресс методы диагностики Биопроба. Для определения токсигенности исследуемую культуру, выращенную на среде Китта-Тароцци, центрифугируют и надосадочную жидкость вводят морской свинке, которая при положительном результате погибает.

Вследствие того, что токсины разных видов клостридий различаются по своим антигенным свойствам, их серологическую идентификацию проводят в реакции нейтрализации на лабораторных животных. С этой целью смесь исследуемого токсина с антитоксической сывороткой (Сl. рerfringens илиСl. novy) вводят подкожно морской свинке. В случае нейтрализации токсина животное остается живым; при отрицательной реакции морская свинка погибает через мин – 4 ч после инъекции.

Схема 3. Микробиологическое исследование при газовой гангрене Иммунохимические исследования. Для быстрого обнаружения токсина Сl.

рerfringens в раневом отделяемом определяют его лецитиназную активность.

Положительная реакция на лецитиназу выявляется помутнением жидкости в пробирке. При отрицательной реакции, характеризующейся нейтрализацией фермента соответствующей антисывороткой, жидкость остается прозрачной.

Микробиологическая диагностика столбняка Возбудитель столбняка С1. tetani проникает в организм человека через поврежденные кожные покровы при травмах и ранениях, у женщин через родовые пути при родах и абортах, у новорожденных через пупочную рану.

Бактериологическое исследование. Материал засевают в среду КиттаТароцци и инкубируют в анаэробных условиях при 37 °С в течение 3-4 сут, наблюдая придонный рост бактерий. Затем делают посевы на сахарный агар в чашкиПетри, в столбик сахарного питательного агарав пробирке. Посевы также инкубируют в анаэробных условиях. На поверхности кровяного агараС1. tetani образует нежные прозрачные колонии, окруженные малозаметной зоной гемолиза. Для получения чистой культуры подозрительные колонии пересевают в пробиркисо средой Китта-Тароцци и сохраняют их под слоем вазелинового масла или в эксикаторе, заполненном смесью инертных газов. Для определения способности выделенной чистой культуры к образованию столбнячного токсина (токсигенности) используют серологические реакции с антителами к тетаноспазмину. Бактериологический метод используют в качестве дополнительного метода для подтверждения диагноза, поскольку он не дает своевременного результата.

Экспресс методы диагностики Биопроба. Проводится для обнаружения столбнячного токсина в исследуемом материале. С этой целью материал растирают в стерильной ступке с песком, заливают изотоническим раствором хлориданатрия для экстрагирования токсина и фильтруют через бумажный фильтр. Часть фильтрата смешивают с антитоксической сывороткой и внутримышечно вводят белым мышам (контрольная группа подопытным животным вводят один фильтрат. Через 1-), сут у мышей появляется ригидность мышц хвоста и задних конечностей. В результате резкого сокращения хвостовых мышц хвост поднимается в виде дуги.

Затем подопытные животные погибают. У животных в контрольной группе признаки интоксикации отсутствуют вследствие нейтрализации токсина антисывороткой. Для определения токсигенности выделенной культуры белым мышам вводят надосадочную жидкость, полученную при центрифугировании этой культуры, выращенной на жидкой питательной среде. В настоящее время биопроба практическине применяется.

Иммунохимические исследования. Токсин в материале может быть обнаружен с помощью серологических реакций in vitro. Метод позволяет получить ответ в течение нескольких часов и обеспечивает своевременную диагностику заболевания.

Профилактические и лечебные препараты Антитоксические сыворотки - антиперфрингенс, антиэдематиенс (антинови), антисептикум. Выпускаются в жидком исухом виде после очистки и концентрации методом ферментативного гидролиза (диаферм-3) антитоксических сывороток, полученных при иммунизации лошадей соответствующими анатоксинами. Применяются для экстренной профилактикии специфической терапии раневой анаэробной инфекции (газовой гангрены).

Адсорбированный столбнячный анатоксин. Получен путем обезвреживания формалином столбнячного токсина с последующей его очисткой, концентрацией и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Входит в состав ассоциированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакцины и других препаратов. Применяется для активной иммунизации против столбняка.



Противостолбнячная сыворотка. Получена из крови лошадей, гипериммунизированных столбнячным анатоксином. Очищена и концентрирована методом диаферм-3. Активность измеряется в международных единицах. Применяется для профилактикиилечения столбняка.

Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный. Получен из гаммаглобулиновой фракции крови людей-доноров, ревакцинированных очищенным сорбированным столбнячным анатоксином. Применяется для пассивной экстренной профилактикистолбняка в сочетании со столбнячным анатоксином при повреждениях кожных покровов, а также для лечения начавшегося заболевания.

ВОЗБУДИТЕЛИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ Кишечные инфекции вызывают: а) энтеробактерии родов Escherichia, Salmonella, Shigella и др.; б) холерные вибрионы; в) анаэробные грамотрицательные неспоровые бактерии Васteroides и Veilonella. Пищевые отравления (токсикоинфекции и интоксикации) вызывают сальмонеллы, протеи и микроорганизмы, продуцирующие белковые токсины – Staphilococcus aureus, Clostridium perfringens, Clostridium botulinum.

Обнаружение возбудителей кишечных инфекций и пищевых отравлений имеет большое диагностическое иэпидемиологическое значение. Оно позволяет подтвердить клинический диагноз.

Лабораторная диагностика эшерихиозов и дизентерии Задания для выполнения лабораторной работы 1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

2. Бактериологическая диагностикаэшерихиозов:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посеваисследуемого материалана среду Эндо. Описать и зарисовать колонии, выросшие на среде Эндо, и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;

в) провести серологическую идентификацию чистой культуры, полученной из подозрительных колоний, в ориентировочной реакции агглютинации на стекле с агглютинирующими ОВ-колисыворотками (серотипирование). Сделать вывод инаметить план дальнейшего анализа.

3. Бактериологическая диагностикадизентерии:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посеваисследуемого материалана среду Эндо. Описать и зарисовать колонии, выросшие на среде Эндо, и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;

в) учесть результаты пересеваподозрительных колоний на среду Ресселя;

г) провести идентификацию чистой культуры:

• по биохимическим свойствам, • по антигенным свойствам в ориентировочной реакции агглютинации на стекле с агглютинирующими сыворотками для идентификации шигелл.

Сделать вывод инаметить план дополнительных исследований.

4. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилактическими препаратами.

Методические указания Материал для исследования: фекалии, ректальные мазки соскобы со, слизистой оболочки.

Микробиологическая диагностика эшерихиозов Бактериологическое исследование (схема 4). Является ведущим в диагностике эшерихиозов. Фекалии засевают на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Патогенные E. coli по основным биологическим свойствам (морфологии, культуральным и биохимическим признакам) не отличаются от непатогенных эшерихий - представителей нормальной микрофлоры кишечника. Для отбора подозрительных колоний применяют метод серотипирования. Материал из лактозоположительных колоний используют для постановки реакции агглютинации на стекле со смесью ОВсывороток, содержащих антитела против наиболее распространенных сероваров патогенных эшерихий. Обычно проверяют на агглютинабельность не менее колоний с каждой чашки При положительном результате ставят реакцию с.

моноспецифическими сыворотками: О26:В6, О55:В5, О111:В4, О124: В 17 и др., после чего делают предварительное заключение. Затем пересевают несколько агглютинабельных колоний на скошенный питательный агар для получения чистых культур. На 3-й день проверяют агглютинабельность чистых культур в реакции на стекле с ОВ-сыворотками. При положительном результате ставят развернутую реакцию агглютинации с соответствующей ОВ-сывороткой.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. При молекулярно-биологических исследованиях материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.

Схема 4. Бактериологическое исследование при эшерихиозах Микробиологическая диагностика дизентерии Бактериологическое исследование (схема 5). Фекалии больного засевают на дифференциально-диагностические среды (агар Эндо, Плоскиреваи др.). При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или слизисто-кровянистых комочков их выбирают петлей, промывают в изотоническом растворе хлорида натрия и наносят на поверхность питательной среды, после чего растирают шпателем. На 2-й день лактозоотрицательные (прозрачные бесцветные) колонии пересевают на среду Ресселя или на короткий "пестрый ряд" с лактозой и глюкозой.

Среда Ресселя: питательный агар, 1 % раствор лактозы, 0,1 % раствор глюкозы и индикатор бромтимоловый синий. Среду готовят таким образом, чтобы внизу она была в виде столбика, а верхняя часть имела скошенную поверхность. Исследуемую культуру засевают уколом в столбики наповерхность среды. При ферментации углеводов происходит изменение цвета среды (желтая окраска); разрывы столбикасвидетельствуют о газообразовании. Изменение цвета во всем объеме среды наблюдается при ферментации лактозы, только столбика - при ферментации глюкозы, так как содержание ее в среде в 10 раз меньше, чем лактозы. Вместо среды Ресселя можно использовать трехсахарную среду (в ее состав входят глюкоза, лактоза, сахароза, мочевина, некоторые солиииндикатор феноловый красный) или другие дифференциально-диагностические среды, позволяющие различать бактерии по способности ферментировать лактозу и глюкозу. Оставшуюся часть колоний используют для постановки ориентировочной реакции агглютинации на стекле со смесью дизентерийных сывороток исмесью сывороток против сальмонелл (для исключения брюшного тифа или сальмонеллеза). Окончательное заключение дают на 4-й день по результатам ферментативных тестов (табл. 4) и реакции агглютинации.





Выделенную чистую культуру используют для определения чувствительности возбудителя к антимикробным препаратам.

Таблица 4. Биохимические признакибактерий родаShigella Ферментация Образо- Декар вание боксиГруппа индола лирование орнитина S. dysenteriae - - - - - В - S. flexneri - - + - - В - S. boydii - - + - В В - S. sonnei - [+] + [+] В - + Условные обозначения: (+) - положительная реакция; (-) - отрицательная реакция; [+] - поздняя реакция; В - вариабельная реакция.

Г л ю к о з ы с г а з о о б р а з о в а н ие м Л а к т о з ы М а н н ит а Д у л ь ц ит а К с ил о з ы Схема 5. Микробиологическое исследование при дизентерии Экспресс-методы диагностики. При биохимических и молекулярнобиологических исследованиях материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.

Серодиагностика. Применяют для ретроспективного обоснования диагноза дизентерии при стертых и хронических формах. Ставят развернутую реакцию агглютинации по типу реакции Видаля и РПГА с эритроцитарными диагностикумами Флекснераи Зонне. Диагностическим титром при дизентерии, вызванной шигеллами Флекснера, считают разведение 1:200, а шигеллами Зонне - 1:100.

Диагностические, профилактические и лечебные препараты Агглютинирующие ОВ-сыворотки против патогенных кишечных палочек: ОВ-колисыворотка О26:В6, ОВ-колисыворотка О111:В4, ОВ-коли- сыворотка О55:В5 и др. Получают путем иммунизации кроликов взвесью эшерихий соответствующего серовараи применяют в реакции агглютинации для идентификации патогенных эшерихий.

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл. Различают групповые и моновалентные сыворотки Получают путем.

иммунизации кроликов определенными видами и сероварами S. dysenteriae, S.

flexneri, S. boydii и S. sonnei с последующей адсорбцией межгрупповых и других лишних антител.

Поливалентный дизентерийный бактериофаг. Содержит фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и Зонне. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики и лечения.

Дизентерийная вакцина спиртовая, сухая. Содержит шигеллы Флекснера и Зонне. Применяют для лечения хронических форм дизентерии.

Препараты эубиотиков - коли-бактерин, бифидумбактерин, бификол, лактобактерин. Применяют с лечебно-профилактическими целями.

Антибиотики: полусинтетические пенициллины, цефалоспорины 2-4-го поколений, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолины, сульфаниламиды, полимиксин и др.

Лабораторная диагностика брюшного тифа, паратифов и сальмонелезов.

Дисбактериоз Современная классификация бактерий рода Salmonella. Род Salmonella включает 2 вида: S. епtеriса (2307 сероваров) и S. bongori (17 сероваров). Вид S.

епtеriса включает 5 подвидов: епtеriса (I), sа1атае (II), аrizопае (IIIa), diarizonae (IIIb), houtenae (IV), indica (V), которые выделены на основании молекулярногенетических признаков (гибридизационного анализа ДНК) и фенотипически различаются по биохимическим свойствам. Внутри подвидов сальмонеллы подразделяются на серовары по O-и Н -антигенам согласно классификации Кауфмана-Уайта. Необходимо помнить, что представители разных подвидов могут иметь общие или идентичные антигены. Абсолютное большинство сероваров (1367) относятся к подвиду епtеriса. Согласно ранее существовавшей классификации, сальмонеллы - представители различных сероваров - рассматривались как самостоятельные виды и имели собственные видовые названия. В настоящее время старые видовые названия используют для обозначения биоваров (сероваров), например S. епtеriса подвидаепtеriса серовара tyrhimurium соответствует S. tyrhimurium, серовара tyrhi - S. tурhi, серовара раratyphi A – S. раratyphi A и т.д. Природным резервуаром бактерий S. епtеriса подвида епtеriса являются теплокровные животные, для остальных - холоднокровные животные и окружающая среда Возбудители заболеваний.

человекаотносятся к подвиду епtеriса.

С эпидемиологической точки зрения сальмонеллы, вызывающие заболевания человека, относят к трем основным группам. Первая группа включает 3 биовара typhi, раratyphi А и С, которые являются возбудителями :

строгих антропонозов (инфицируют только человекаипередаются от человекак человеку прямо илиопосредованно - через пищу, воду). Вторая группавключает серовары, которые адаптировались к определенному виду животных. Некоторые из этих сероваров патогенны для человека (dublin, gallinarum, schotmulleri и др.).

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 8 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.