WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |

Схема 1. Микробиологическое исследование при стафилококковых инфекциях Экспресс методы диагностики Иммунохимические исследования основаны на обнаружении антигенов возбудителя в материале от больного с помощью чувствительных серологических реакций. Биохимические и молекулярно-биологические исследования.

Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.

Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций Бактериоскопическое исследование (схема 2). Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала окрашивают по Граму и, микроскопируют. При положительном результате обнаруживают цепочки грамположительных кокков. Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиноке илинебольшими группами по 2 – 3 бактерии.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по Граму и, микроскопируют. Для получения чистой культуры 1 - 3 подозрительные колонии пересевают в пробиркисо скошенным кровяным агаром исахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие, величиной с булавочную головку, мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя среду прозрачной.

По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) 1-гемолитические, илизеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза; 3) -гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. По данному признаку все стрептококкиделят на серологические группы (А, В, С, D и т.д.).

Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном С, выделенным из исследуемой культуры, и сыворотками (обычно 4 наиболее распространенные серогруппы - А, В, С и D).

Большинство патогенных для человека -гемолитических стрептококков относится к серологической группе А. По содержанию типоспецифических антигенов протеиновой природы -гемолитические стрептококкиподразделяются на серовары, из которых 47 относятся к группе А. Серовары стрептококков определяют в реакции агглютинации. Развернутое серологическое исследование и типирование стрептококков проводят главным образом для эпидемиологического обследования. Выделенную культуру стрептококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом дисков. При подозрении на сепсис делают посевы из крови больного.

Схема 2. Микробиологическое исследование при стрептококковых инфекциях Экспресс методы диагностики Иммунохимические исследования. При отдельных нозологических формах стрептококковой инфекции устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК, реакции преципитации и др.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. При отдельных нозологических формах стрептококковой инфекции устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК или реакции преципитации. Антитела к Острептолизину определяют главным образом для подтверждения диагноза ревматизма. Реакция основана на подавлении способности О-стрептолизина растворять эритроциты при наличии в крови больного соответствующих антител.

Реакцию ставят со стандартным сухим О-стрептолизином.

Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных грамотрицательными аэробными бактериями Бактериоскопическое исследование. Из исследуемого материала (гной, раневое отделяемое, участкиожоговой ткани и др.) готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Обнаружение в мазках грамотрицательных бактерий илидругой микрофлоры позволяет сделать предварительное заключение.

Бактериологическое исследование. Для выделения культуры бактерий Рseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) исследуемый материал засевают в чашки Петри на питательный агар или на ЦПХ-агар, содержащий Nцитилпиридиний-хлорид (ЦПХ), который угнетает рост 24 видов микроорганизмов, возможных ассоциатов псевдомонад в клиническом материале.

Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. Синегнойная палочка образует круглые плоские слизистые колонии, окрашивая среду характерным синезеленым пигментом. При бактериоскопии нативных препаратов в «раздавленной» или«висячей» капле, приготовленных из колоний, обнаруживаются подвижные и слегкаизогнутые палочки; в мазках, окрашенных по Граму, - грамотрицательные палочки Чистые культуры Р. aeruginosa идентифицируют по биохимическим.

признакам и образованию пигмента.

Патогенные штаммы Р. aeruginosa образуют белковые экзотоксины:

гистотоксин, обладающий цитотоксическим свойством, и лейкоцидин, лизирующий лейкоциты человека. Эти токсины могут быть обнаружены путем биопробы. Для эпидемиологического анализа госпитальных инфекций определяют серовары в реакции агглютинации, пиоциновары и фаговары.

Для выделения энтеробактерий исследуемый материал засевают на одну из дифференциально-диагностических сред, например на среду Эндо. Для выделения бактерий родаРrоteus используют метод Шукевича.



Экспресс методы диагностики Иммунохимические исследования. Патогенные штаммы Р. aeruginosa выделяют различные растворимые белковые (экзотоксины и экзоферменты) и небелковые (экстрацеллюлярная слизь) антигены, которые могут быть обнаружены в материале от пациента (из очага, в крови илимоче) с помощью чувствительных серологических реакций.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Микробиологические исследования при сепсисе Материал для исследования: микробиологическое исследование крови является ведущим при лабораторной диагностике сепсиса Кроме того, при.

септикопиемиях исследуют материал из первичных и вторичных местных очагов инфекции. Кровь берут в период подъема температуры до начала антибиотикотерапии из локтевой вены в количестве не менее 10 мл у взрослых и мл у детей, так как микроорганизмы находятся в крови в сравнительно небольших количествах. Посевы делают у постелибольного в колбы с 50-100 мл питательной среды. Сравнительно большие объемы питательной среды (в 10 раз превышающие количество крови) необходимы для устранения бактерицидного действия сывороточных белков. В случае транспортировкикрови кней добавляют антикоагулянты: цитрат илиоксалат натрия, декстран сульфат, гепарин.

Бактериологическое исследование. Является ведущим при лабораторной диагностике сепсиса. Посевы производят на жидкие среды обогащения: сахарный бульон идр.; при подозрении наанаэробную флору - на тиогликолевую среду или среду Китта-Тароцци и инкубируют их при 37 °С в течение 10 дней при ежедневном контроле. В случае отсутствия роста микроорганизмов дают отрицательный ответ. При наличии роста делают мазки, которые окрашивают по Граму. Выделенную чистую культуру микроорганизмов идентифицируют и определяют ее чувствительность кантибиотикам.

При оценке результатов необходимо исходить из того, что сепсис является тяжелым общим инфекционным заболеванием, развивающимся в условиях резкого угнетения всех основных механизмов иммунитета. Возбудителями сепсисаявляются различные патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.

Однократный посев крови при сепсисе не всегда приводит к выделению культуры. Более информативным является трехкратный посев крови с суточным интервалом. На фоне антибиотикотерапии кровь у больных для посева следует брать 5 - 6 раз.

Диагностические, профилактические и лечебные препараты Стафилококковый анатоксин (очищенный и адсорбированный).

Получают из нативного анатоксина путем его осаждения трихлоруксусной кислотой с дополнительной очисткой этиловым спиртом иадсорбцией на гидрате оксидаалюминия. Обладает высокими иммуногенными свойствами. Применяется для активной иммунизации с целью профилактикистафилококковых инфекций и для лечения стафилококковых заболеваний.

Стафилококковая вакцина. Взвесь коагулазоположительных золотистых стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяется с целью лечения при длительно и вяло текущих стафилококковых заболеваниях.

Чаще используют аутовакцину.

Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый. Гаммаглобулиновая фракция сыворотки крови, содержащая стафилококковый антитоксин. Готовят из человеческой крови, содержащей высокие титры антител, или крови доноров, иммунизированных стафилококковым адсорбированным анатоксином. Применяется для специфического лечения при стафилококковых заболеваниях.

Стафилококковый (стрептококковый) бактериофаг (жидкий). Фильтрат фаголизата стафилококков (стрептококков). Применяется наружно, внутрикожно, внутримышечно для лечения при стафилококковых (стрептококковых) заболеваниях.

Диагностические стафилококковые фаги. Набор типоспецифических фагов для фаготипирования стафилококков.

О-стрептолизин сухой. Лиофильно высушенный фильтрат бульонной культуры стрептококка - активного продуцента О-стрептолизина. Применяется для постановкисерологических реакций - определения анти-О-стрептолизина в сыворотках крови больныхстрептококковыми инфекциями (чаще ревматизмом).

Антибиотики. Грамотрицательные бактерии - -лактамы, спектр действия которых сдвинут в сторону грамотрицательных микроорганизмов, хлорамфеникол, аминогликозиды, тетрациклины, сульфаниламиды, фторхинолоны и др. Грамположительные бактерии - -лактамные антибиотики, ванкомицин, тетрациклины, аминогликозиды, макролиды, линкомицины, сульфаниламиды, фторхинолоны и др.

Лабораторная диагностика анаэробных инфекций Анаэробные и смешанные (анаэробно-аэробные) инфекции представляют одну из самых значительных категорий гнойно-воспалительных заболеваний у человека. Основная массаинфекций, протекающих с участием анаэробов, имеет, как правило, эндогенное происхождение. Возбудители анаэробных инфекций:

пептококки петострептококки бактериоды, фузобактерии, эубактерии,,, клостридии и др., являются представителями нормальной микрофлоры человека.

Развитию инфекции способствуют травмы, ожоги оперативное вмешательство,, местное нарушение кровообращения, стресс, голодание, переутомление, хронические заболевания, применение лекарственных препаратов:

иммунодепресантов, цитостатиков, антибиотиков, глюкокортикоидов идр.

Основное значение в лабораторной диагностике заболеваний, вызванных данной группой микроорганизмов, имеет бактериологическое исследование, проводимое в строго анаэробных условиях, так как даже незначительное количество кислородавоздухарезко тормозит размножение бактерий - анаэробов.





Для создания анаэробных условий используют специальные методы взятия материала элективные питательные среды и специальную аппаратуру для, культивирования анаэробов. Бактериоскопия дает возможность распознать смешанную инфекцию и сделать предположение о ее возбудителях.

Серодиагностика данных инфекций практически не проводится в связи с трудностью выбора антигенов и низким титром антител. Многие анаэробные бактерии вырабатывают экзотоксины, поэтому важное значение в микробиологической диагностике имеют биопробы на лабораторных животных.

Задания для выполнения лабораторной работы 1. Приготовить мазкииз гноя, окрасить их по Граму и микроскопировать.

Сделать предварительное заключение и наметить ход дальнейшего анализа.

2. Сделать окончательное заключение о возбудителе или возбудителях раневой инфекции на основании данных, полученных из бактериологической лаборатории.

Методические указания Материал для исследования: гной, раневое отделяемое, отечная жидкость, кусочкимышечной ткани, перевязочный материал, кетгут. Кровь – при сепсисе.

При подозрении настолбняк у женщин после родов илиаборта - выделения из матки, у новорожденных - выделения из пупка. Рекомендуется брать материал из разных участков очагапоражения, особенно из глубоких слоев. Для обеспечения бескислородных условий взятие материала производят шприцем с хорошо притертым поршнем до полного его заполнения и вытеснения воздуха Затем.

шприц надевают на иглу, вставленную через резиновую пробку в пробирку со смесью инертных газов (N2 + Н ) и СO2, и вводят в нее исследуемый материал, который изучают в микробиологической лаборатории. Используют также различные специальные транспортные среды, в которые помещают материал, взятый у больных.

Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробными бактериями Возбудителями гнойно-воспалительных процессов довольно часто являются неспорообразующие анаэробные бактерии, принадлежащие к родам Bacteroides, Veillonella, Peptococcus,Peptostreptococcus. Они вызывают как моноинфекции, так и смешанные инфекции во всевозможных сочетаниях друг с другом и с аэробными бактериями – Рseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, E. coli, кокками.

Бактериологическое и бактериоскопическое исследования. Посевы производят в пробирку с предварительно прокипяченной средой Китта-Тароцци и в пробирку с полужидким тиогликолевым агаром и инкубируют при 37 °С в течение 24-48 ч. После просмотравыросшей культуры делают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Бактериоскопия дает возможность установить однородность или неоднородность культуры, а по морфологии клеток и отношению к окраске по Граму ориентировочно отнести ее к определенному роду. Для получения чистой культуры делают пересевы на сахарный кровяной агар в чашки Петри, которые инкубируют в анаэробных условиях 3-4 сут до формирования изолированных колоний. После изучения колоний их пересевают на среду Китта-Тароцци. Идентификацию выделенной чистой культуры производят на основании присущих им дифференциальных признаков, которые определяют в тех же строго анаэробных условиях (табл. 3).

Экспресс методы диагностики. Анаэробные бактерии вырабатывают специфические метаболиты, включая летучие жирные кислоты с короткой цепью и нелетучие органические кислоты. Для их обнаружения в материале используют ГЖХ.

Таблица 3. Дифференциальные признаки неспорообразующих и спорообразующих анаэробных бактерий Бактерии Признак Форма и расположение клеток Подвижность - - - - + - + + + + Споры - - - - + + + + + Окраскапо + + - - + + + + + Граму Ферментация с + - + + с + с - углеводов Свертывание/ - - + + + X - + + пептонизация молока Образование + - + - + - - - X X H2S Образование - + - - - + - - - - - индола Разжижение - - - - + + + + + + желатина Восстановление - + - + + - X X X - - нитратов Гемолиз - + - - + - X + + + + эритроцитов Образование - - - - + + + + + токсина Условные обозначения: (+) – наличие признака (-) – отсутствие признака; (X) – ;

непостоянный признак; (- +) – отсутствие признака у большинства штаммов; (+ -) – наличие признакау большинстваштаммов; (с) – слабая ферментация.

P e p t o c o c c u s P e p t o s t r e p t o c o c c us Veilonella Cl.

septicum Cl. sordelli Cl.

histolyticum Cl.

Cl. novy Bacteroides perfringenes О д и н о ч н ы е к о к к и Ц е п о ч к и к о к к о в К о р о т к и е ц е п о ч к и к о к к о в М е л к и е п а л о ч к и К р у п н ы е п а л о ч к и К р у п н ы е п а л о ч к и То н к и е п а л о ч к и М е л к и е п а л о ч к и М е л к и е п а л о ч к и Микробиологическая диагностика раневой анаэробной клостридиальной инфекции (газовая гангрена) Возбудителями являются бактерии рода Clоstridium (схема 3). Чаще всего возбудителем газовой гангрены является Сl. perfringens. Заражение происходит при попадании в рану почвы илипыли загрязненной спорами клостридий. В, анаэробных условиях (в глубине раны) они прорастают в вегетативные клетки, продуцирующие разнообразные токсины, которые вызывают распад и некротизацию мышечной ткани. В этом процессе могут участвовать стафилококки синегнойная палочка, протей и другие бактерии, в значительной, мере осложняющие течение заболевания. Лабораторную диагностику проводят в двух направлениях с целью обнаружения возбудителя в некротических тканях и экзотоксина в отечной жидкости.

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.