WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |

Методы обнаружения нуклеиновых кислот возбудителя. Нуклеиновые кислоты (НК) возбудителя можно обнаружить в исследуемом материале от больного с помощью методов гибридизации НК (ДНК-зондов) и полимеразной цепной реакции - ПЦР. Эти методы применяют преимущественно для обнаружения плохо- или некультивируемых возбудителей, присутствующих в материале в малых количествах (ВИЧ, вирус гепатита В, М.tuberculosus и др.) в связи с их высокой чувствительностью: метод нуклеиновых "зондов" позволяет обнаруживать НК возбудителя в концентрации 10-10 г/мл; ПЦР теоретически позволяет обнаружить единичные копии НК. Метод "зондов" является высокоспецифичным. При использовании ПЦР существует высокая вероятность получения ложноположительной реакции, что требует квалифицированной интерпретации полученных результатов. Необходимо также помнить о возможности контаминации материала посторонними НК. ПЦР рационально использовать в качестве экспресс-метода для постановки предварительного диагноза, нуждающегося в обязательном подтверждении с помощью других более достоверных диагностических исследований.

Серодиагностика и аллергодиагностика Серодиагностика. Метод основан на обнаружении антител в сыворотке крови больного иопределении динамикиих нарастания в ходе заболевания. Для серодиагностики применяют различные иммунологические реакции (агглютинации, связывания комплемента, непрямой гемагглютинации и др.). В качестве стандартных антигенов используют живые культуры микроорганизмов или диагностикумы - убитые взвеси микроорганизмов или экстракты из них, полученные химическим путем.

Серодиагностические исследования часто проводят и для эпидемиологического анализа инфекционной заболеваемости, а также для оценки эффективности вакцинопрофилактики.

При серодиагностических исследованиях необходимо учитывать диагностический титр обнаруженных антител, т.е. такое разведение исследуемой сыворотки начиная с которого положительная реакция имеет диагностическое, значение. Более высокую информативность дают серологические исследования парных сывороток крови больного, взятых в начале болезни и через разные промежутки времени в ходе ее развития. Диагностическое значение имеет нарастание титрав 4 раза и более в динамике заболевания.

Аллергодиагностика. Кожно-аллергические пробы применяют для выявления гиперчувствительности кразличного родаантигенам (аллергенам) при диагностике рядаинфекционных заболеваний (туберкулез, бруцеллез, туляремия и др.), а также атопий и других неинфекционных аллергических состояний.

Правила биологической безопасности при работе с патогенными микробами В зависимости от степени патогенности и контагиозности возбудителей принято выделять четыре уровня биологической опасности и соответствующих мероприятий, необходимых для предупреждения заражения в лаборатории.

Первый уровень (работа с непатогенными микроорганизмами). Необходимо соблюдение стандартных правил.

Второй уровень (работа с низковирулентными микроорганизмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование лабораторной одежды изащитных перчаток; обязательное обеззараживание всех загрязненных отходов; ограничение доступа в лабораторию. Для предотвращения попадания микробов в воздух рабочего помещения выполнение механических манипуляций, сопряженных с высокой вероятностью распыления микроорганизмов, необходимо осуществлять в специализированных закрытых легкодезинфицируемых настольных боксах.

Третий уровень (работа с высоковирулентными микроорганизмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование специальной защитной лабораторной одежды; контроль доступав лабораторию.

Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в специализированных боксах.

Четвертый уровень (работа с возбудителями особо опасных инфекций (ООИ). Разрешена исключительно в специализированных режимных лабораториях, имеющих оборудование, необходимое для эффективной защиты от патогенных микробов, их контроля и уничтожения. К числу дополнительных правил и мероприятий относятся наличие отдельных помещений для смены лабораторной одежды идушевых, обязательное обеззараживание всех отходов лаборатории. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в специализированных настольных боксах, снабженных системами стерилизации воздуха.

Оценка результатов клинико-диагностических исследований Обнаружение патогенных микроорганизмов, являющихся возбудителями заболеваний (например, микобактерии туберкулеза, гонококки и др.), имеет решающее значение для постановкидиагноза.

Выявление роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболеваний должно быть основано на строгой аргументации.

Обязательным условием является клиническое, эпидемиологическое, микробиологическое исерологическое исключение возбудителей инфекционных болезней (например, возбудителей кишечных инфекций, венерических болезней и др.). Для оценкиролиусловно-патогенных микроорганизмов в патологии могут быть использованы следующие критерии.

1. Выделение микроорганизмов из крови, спинномозговой жидкости илидругих жидкостей организма, которые в норме у здоровыхлюдей являются стерильными.

2. Обнаружение в исследуемом материале, особенно при дисбактериозах, условно-патогенных микроорганизмов в достаточно больших количествах (например, 105-107 микробных клетокв 1 мл). Для этого проводят количественное определение микроорганизмов по числу колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 г или 1 мл испытуемого образца. Эти количественные показатели могут варьировать в зависимости от вида микроорганизмов, типа исследуемого материала, характераи стадии заболевания.



3. Повторное, многократное (в течение суток иличерез сутки) выделение одного и того же микроорганизма из одного и того же материалаот больного (например, из крови при сепсисе и т.д.).

4. Обнаружение идентичных условно-патогенных микроорганизмов в разных образцах материала(например, при пищевых токсикоинфекциях - в промывных водах желудка, рвотных массах, испражнениях, пищевых продуктах).

5. Нарастание титраантител в 4 раза и более в парных сыворотках крови больного в отношении условно-патогенного микроорганизма, который предполагается как возбудитель данного патологического процесса В ряде случаев рекомендуется.

использовать в качестве антигенов аутоштаммы микроорганизмов, выделенные от больных.

6. Положительные кожно-аллергические реакции у больных с аллергенами, приготовленными из условно-патогенных микроорганизмов.

7. В случае внутрибольничных (нозокомиальных) инфекций - выделение идентичных культур микроорганизмов от группы больных.

8. Совпадение данных лабораторного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с эффективностью антимикробной терапии в клинических условиях, подтверждаемое улучшением состояния больного и уменьшением количестваилиэлиминацией соответствующих микроорганизмов.

Условно-патогенные микроорганизмы (синоним: оппортунистические) представляют собой большую группу микроорганизмов, занимающих различное систематическое положение. Они встречаются среди аэробных и анаэробных бактерий, грибов, простейших. В клинической микробиологии наиболее часто встречаются оппортунистические микроорганизмы, относящиеся к родам Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia, Proteus, Enterobacter, Citrobacter, Pseudomonas, Candida и др.

Оформление результатов лабораторных микробиологических исследований Результаты лабораторных исследований оформляют на специальных бланках, которые передают лечащему врачу.

1. В ответе прежде всего указывают наличие патогенных, а также условнопатогенных микроорганизмов, обнаруженных при микробиологическом исследовании. Сообщают также данные лабораторного определения чувствительности микроорганизмов кантибиотикам.

2. При обнаружении микробных ассоциаций перечисляют все микроорганизмы, указывают доминирующие виды иколичественные показатели.

3. В соответствии с правилами международной номенклатуры в ответах приводят видовые названия микроорганизмов, например: Staphylococcus aureus и т.д.

4. С целью ускорения лабораторных исследований в ряде случаев при выделении условно-патогенных микроорганизмов вполне допустимо в ответе ограничиться указанием только родовой принадлежности обнаруженных микроорганизмов, например, Ргоteus spp., Candida spp. и т.д.

ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ Раневые и нераневые гнойные инфекции часто встречаются в хирургической, акушерско-гинекологической, терапевтической и других клиниках. Нередко они носят характер внутрибольничной инфекции.

Возбудителями инфекции являются различные бактерии, которые относятся к разным семействам, родам и видам. Бактерии, перечисленные в таблице 1, вызывают гнойно-воспалительные процессы различной локализации, в том числе ангины, фурункулы, циститы и пиелиты, плевриты, перикардиты, сепсис и др.

Многие из этих возбудителей встречаются в нормальной микрофлоре человекаи проявляют свою патогенность только при нарушении нормальной экологии.

Некоторые из бактерий являются возбудителями таких форм заболеваний, которые не сопровождаются выраженным гнойно-воспалительный процессом.

Например, стрептококкивызывают скарлатину, рожистое воспаление; С. tetani – столбняк. Стафилококки, стрептококки, протей, кишечная палочкаианаэробные бактерии нередко вызывают смешанную инфекцию в разнообразных сочетаниях как между собой, так и с другими микроорганизмами – вирусами, грибами.

Лабораторная диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных аэробными бактериями Гнойную инфекцию чаще всего вызывают стафилококки (сем.

Мiсrососсасеае), которые относятся квиду S. aureus, реже к видам S. epidermidis и S. saprophyticus; стрептококки (сем. Streptoсоссасеае) - Streptococcus pyogenes, реже S. pneumoniae. Наряду с ними важная роль принадлежит Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus spp. и другим условнопатогенным микроорганизмам. Кроме того, при стоматологических заболеваниях встречаются Streptococcus sanguis, S. mutans, S. mitis и др.

Таблица 1. Возбудителираневой инфекции и гнойно-воспалительных процессов Аэробные бактерии Анаэробные бактерии Грамположительные бактерии Спорообразующие Chryseobacterium indologenes грамположительные анаэробы Chryseobacterium meningosepticum Clostridium perfringenes Enterococcus faecalis и другие виды C. oedermatiens и другие возбудители энтерококков раневой анаэробной инфекции (газовой Staphylococcus aureus и другие виды гангрены) стафилококков С. tetani – возбудитель столбняка Streptococcus pyogenes S. faecalis Неспорообразующие S. agalactiae грамположительные анаэробы Peptococcus spp Грамотрицательные бактерии Peptostreptococcus spp.

Citrobacter koseri Propionibacterium acnes Enterobacter spp.

Escherichia coli Неспорообразующие Haemophilus influenzae грамотрицательные анаэробы Klebsiella spp. Bacteroides spp.

Moraxella catarrhalis Prevotella spp.

Proteus spp. Porphiromonas spp.





Pseudomonas aeruginosa Fusobacterium spp.

Salmonella enterica Veilonella spp.

Задания для выполнения лабораторной работы ЗАНЯТИЕ Микробиологическое исследование гноя при подозрении на стафилококковую или стрептококковую инфекцию. Материал - гной из раны (раневое отделяемое). Для выявления источника стафилококковой внутрибольничной инфекции исследуют материал, взятый тампоном из зеваи со слизистой оболочки носа здоровых людей: больничного персонала а также, работников детских учреждений.

1. Бактериоскопическое исследование: приготовить мазкииз чистых культур возбудителей гнойных инфекций, а также из гноя ислизистого отделяемого зева Окрасить их по Граму, микроскопировать и зарисовать. Сделать.

заключение и наметить план дальнейшего анализа.

2. Ознакомиться с питательными средами, применяемыми при микробиологической диагностике гнойных и раневых инфекций. Указать назначение отдельных питательных сред.

3. Бактериологическое исследование: учесть результаты готовых посевов и мазков из слизистого отделяемого зева на чашки с кровяным агаром:

а) описать колонии и отметить наличие илиотсутствие гемолиза;

б) приготовить мазки из колоний, окрасить их по Граму и микроскопировать;

в) пересеять колонию стафилококка в пробирку со скошенным питательным агаром иколонию стрептококка - на скошенный кровяной агар и сахарный бульон для получения соответствующих чистых культур.

ЗАНЯТИЕ 1. Продолжение бактериологического исследования гноя имазков из зева и носабактерионосителей:

а) отметить характер роста культуры (наличие золотистого пигмента) в пробирке с питательным агаром. Сделать мазок, окрасить по Граму и микроскопировать;

б) отметить наличие или отсутствие гемолиза на кровяном агаре и помутнение илиосадок на сахарном бульоне. Сделать мазок, окрасить по Граму и микроскопировать.

2. В случае выделения золотистого стафилококка:

а) определить его способность продуцировать плазмокоагулазу, лецитиназу;

б) установить фаготипы стафилококков, выделенных из разных источников - больных и бактерионосителей по готовым пробам.

3. Отметить по готовым посевам чувствительность выделенных стафилококков к антибиотикам.

4. Дать краткую характеристику демонстрируемым антимикробным, диагностическим и лечебно-профилактическим препаратам.

Сделать окончательное заключение на основании анализа собственных, демонстрационных и полученных из лаборатории данных о видах выделенных культур стафилококкаистрептококкаиоб их патогенных свойствах. Определить источник госпитальной инфекции на основании фаготипов, выделенных от больных и носителей стафилококковой инфекции.

Методические указания Материал для исследования: гной, экссудат, раневое отделяемое, перевязочный материал, мазки слизи из носоглотки и зева кровь - при, подозрении насепсис.

Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций Бактериоскопическое исследование (схема 1 ). Из исследуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по Граму и микроскопируют. Наличие в препаратах грамположительных гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений, позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой инфекции.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают петлей на чашкис кровяным и желточно-солевым агаром (ЖСА) для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие илиотсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2 - 3 колонии пересевают в пробиркисо скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков (табл. 2).

Таблица 2. Дифференциальные признакистафилококков Признак Вид S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus Образование:

плазмокоагулазы + - - лецитиназы + - - + - - -токсина Ферментация:

глюкозы + + - маннита в анаэробных условиях + - + Чувствительность кновобиоцину S S R Условные обозначения: (+) - наличие признака (-) - отсутствие признака; (S) - ;

чувствительный; (R) - резистентный.

Постановка реакции на плазмокоагулазу. Разведенную в 2 раза плазму крови разливают по 0,4 мл в пробирки вносят туда по одной петле каждой, исследуемой культуры стафилококкаипомещают в термостат при 37 °С. Через 2, 4 и 24 ч отмечают результаты опыта. При наличии плазмокоагулазы образуется сгусток. В некоторых случаях наряду с плазмокоагулазой и лецитиназой определяют фибринолизин, гиалуронидазу, ДНКазу, а также ставят дермонекротическую пробу на кролике.

Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококкаот больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фагиразводят до титра указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на, питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают наследующий день по наличию лизиса культуры. Проводят определение чувствительности стафилококка к антибиотикам.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.