WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Микробиологическая диагностикараневых, гнойно-воспалительных, кишечныхи воздушно-капельных инфекций Практическое пособие по специальностям «Фармация» (060108) «Биология» (020201) Воронеж 2004 2 Утверждено научно-методическим советом фармацевтического факультета, протокол № 1 от 20.01.2004; биолого-почвенного факультета, протокол №20 от 11.06.2004 Составители: РахмановаТ.И.

Семенихина А.В.

НехаеваГ.И.

ПоповаТ.Н.

Научный редактор: доц. Грабович М.Ю.

Практическое пособие подготовлено на кафедре аналитической имедицинской биохимии и микробиологии биолого-почвенного факультета Воронежского государственного университета.

Рекомендуется для студентов I курсаотделения средне-специального образования и II курса отделения высшего образования фармацевтического факультета, студентов III и IV курсов биолого-почвенного факультета.

3 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ МЕТОДЫ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ……………………………………………………………………4 ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ…………………………………………………………………………11 Лабораторная диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных аэробными бактериями…………………………………………………………...11 Лабораторная диагностикаанаэробных инфекций……………………………..20 ВОЗБУДИТЕЛИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ………...26 Лабораторная диагностикаэшерихиозов идизентерии………………………..26 Лабораторная диагностика брюшного тифа, паратифов и сальмонелезов.

Дисбактериоз………………………………………………………………………31 Лабораторная диагностикахолеры………………………………………………39 Лабораторная диагностика пищевых токсикоинфекций, интоксикаций бактериальной природы…………………………………………………………..43 ВОЗБУДИТЕЛИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ И ДРУГИХ ВОЗДУШНО-КАПЕЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ……………………………………...45 Лабораторная диагностикаменингококковой инфекции, коклюша и дифтерии…………………………………………………………………………...Лабораторная диагностикатуберкулеза…………………………………………ОСНОВНАЯ ЛИТЕРАТУРА……………………………………………………….ВВЕДЕНИЕ В данном пособии изложена лабораторная диагностика бактериальных инфекций, проводимая для установления этиологической и патогенетической роливыделяемых из организма больного микроорганизмов, выбораэффективных иммунологических и химиотерапевтических препаратов.

При изучении частной микробиологии отдельных заболеваний особое значение имеют правильный выбор материалов для лабораторного исследования, сроки исследования, применение адекватных методов, оценка полученных результатов, выбор методов лечения и специфической профилактики При.

анализе результатов лабораторных исследований для постановкиокончательного диагноза заболеваний необходимо, прежде всего, определить возможную роль патогенных микроорганизмов, оценить роль условно-патогенной микрофлоры и определить чувствительность микроорганизмов к антибиотикам. Результаты исследований используются для проведения эпидемиологического анализа заболеваемости с целью установления источника инфекции, путей ее передачи, выявления микробоносителей и др.

Рассматриваемые в данном пособии микроорганизмы сгруппированы с учетом патогенетических и эпидемиологических признаков вызываемых ими инфекций: раневых, гнойных, кишечных и воздушно-капельных.

МЕТОДЫ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ Основной задачей клинико-диагностических микробиологических исследований является установление этиологического агента инфекционного заболевания - микроорганизма-возбудителя. Для решения этой задачи используют различные диагностические методы, которые можно подразделить надве группы в зависимости от подходак определению возбудителя. Первая группавключает методы, направленные на обнаружение присутствия в материале от больного самого возбудителя, а также его антигенов, нуклеиновых кислот (НК), характерных продуктов его жизнедеятельности или органических соединений, входящих в его состав.

Вторая группа диагностических методов основана на выявлении специфической иммунной реакции на данного возбудителя со стороны макроорганизма: гуморальной - антител против возбудителя (серодиагностика) иликлеточной - аллергодиагностика.

Существующие методы диагностики отличаются друг от друга трудоемкостью, сроками проведения исследований, чувствительностью и специфичностью, а также информативностью полученных данных. Выбор методов исследования зависит от предварительного клинического диагноза заболевания, его сроков и определяется биологическими свойствами микроорганизма-возбудителя и особенностями его взаимодействия с макроорганизмом в ходе инфекционного процесса.

Задания для выполнения лабораторной работы 1. Ознакомиться с основными правилами выбора взятия и, транспортировки исследуемого материала Заполнить типовые бланки.

для направления материалав лабораторию.

2. Изучить схемы и методы микробиологической диагностики основных групп микроорганизмов. При оценке результатов лабораторных исследований определить патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.

Методические указания Основные правила взятия и направления материала в клиникодиагностическую микробиологическую лабораторию Результаты микробиологических исследований во многом зависят от правильного выбора материала для исследования, соблюдения всех правил его получения и направления в лабораторию. Выбор материала определяется клинической картиной заболевания, предполагаемой локализацией возбудителя в организме на данном этапе инфекционного процессаи путями его выделения в окружающую среду.



1. Материал берут в ранние срокизаболевания, до начала антимикробной терапии. Это повышает вероятность выделения возбудителя. Следует исключить попадание в образец антибиотиков, антисептиков, дезинфектантов, а также частиц ваты, содержащей свободные жирные кислоты. Важным условием является достаточное количество материала для исследования (например, не менее 5-10 мл крови, 3-5 мл мочи и т.д.).

2. Любой клинический материал для микробиологических исследований рассматривается как потенциально опасный для человека. Поэтому при получении, хранении и транспортировке материала в лабораторию строго соблюдают правилатехникибактериологической безопасности.

3. Материал собирают, соблюдая правила асептики для предупреждения, его возможной контаминации нормальной микрофлорой организма больного и микроорганизмами окружающей среды. После взятия материала его в максимально короткие срокидоставляют в лабораторию. При отсутствии такой возможности материал сохраняют непродолжительное время, соблюдая определенные правила.

Способ сохранения материала определяется свойствами предполагаемого возбудителя и самого материала В большинстве случаев возможно.

непродолжительное хранение в холодильнике при температуре 4 °С. При необходимости длительного хранения материал можно подвергнуть глубокому замораживанию при температуре -20 °С и ниже. Еслипредполагаемый микробвозбудитель чувствителен к действию низких температур, материал необходимо сохранять в термостате при 37 °С. Для подавления размножения сопутствующей микрофлоры можно использовать антимикробные препараты.

4. Материал транспортируют в специальных биксах, пеналах или металлических контейнерах, которые после использования подвергают дезинфекции.

5. Для серологического исследования у больного натощак берут кровь в количестве 5-6 мл из локтевой вены при соблюдении правил асептики Кровь.

ставят в термостат на 30-60 мин; образовавшийся кровяной сгустокотделяют от стенкистерильной стеклянной палочкой иоставляют материал в холодильнике на 18-20 ч. Отстоявшуюся сыворотку осторожно сливают в стерильную пробирку; в случае примеси эритроцитов ее центрифугируют. Сывороткаможет храниться в стерильных условиях в холодильнике до 1 мес. Для более длительного хранения ее замораживают при температуре от -20 до -70 °С.

6. В микробиологической лаборатории все остатки патологического материалаподлежат уничтожению (путем автоклавирования).

7. Все материалы, направленные в лабораторию, должны иметь сопроводительный документ - направление на специальном бланке, где указаны фамилия, имя, отчество больного, возраст, вид материала дата взятия,, предполагаемый клинический диагноз идругие сведения.

Методы клинико-диагностических микробиологических исследований Методы обнаружения возбудителя в материале от больного Микроскопические методы. Микроскопические методы применяют для обнаружения возбудителей непосредственно в исследуемом материале.

Для выявления бактерий (бактериоскопические исследования), а также грибов и простейших применяют световые методы микроскопии окрашенных или нативных препаратов, приготовленных из материала, полученного от больного.

Преимущество микроскопических исследований состоит в быстроте (осуществление требует не более 30-60 мин), простоте и дешевизне. Основным недостатком метода является низкая специфичность - невозможность видовой идентификации обнаруженных микроорганизмов, а в ряде случаев - их дифференциации между собой (например, эшерихий, сальмонелл и шигелл).

Чувствительность также невысока: микроскопический метод позволяет обнаружить возбудителя при его концентрации не менее 106 микробных клетокв 1 мл или 1 г исследуемого материала.

В большинстве случаев микроскопический метод имеет ориентировочное значение и позволяет получить предварительные данные о микробах, присутствующих в материале, и наметить пути дальнейших исследований. Вместе с тем при некоторых инфекциях диагностическая ценность микроскопического исследования весьма велика и является основанием для постановки окончательного диагноза заболевания, например, возвратного тифа, гонореи, дерматомикозов идр.

Необходимо помнить, что некоторые бактерии (хламидии, микоплазмы) имеют малые размеры, лежащие за пределами разрешающей способности световой микроскопии, и не могут быть выявлены с помощью этих методов.

Вирусоскопические исследования осуществляют с использованием электронной микроскопии, что в сочетании с компьютерными системами анализа изображений позволяет осуществлять предварительную идентификацию вирусов по морфологии. Достоинство метода возможность обнаружения ранее :

неизвестных вирусов. Чувствительность аналогична бактериоскопическому.

Микробиологические методы. Основаны на выделении чистой культуры возбудителя из материала полученного от больного, и ее последующей, идентификации. Микробиологические методы отличаются высокой чувствительностью и специфичностью. Располагая чистой культурой возбудителя, можно определить его родовую и видовую принадлежность и осуществить внутривидовое типирование, обнаружить факторы вирулентности, а также определить чувствительность к антибиотикам, что необходимо для рационального выбораэтиотропной терапии.





Для эпидемиологического анализа вспышек инфекционных заболеваний проводят типирование культур возбудителей, выделенных от разных больных и из внешних объектов - вероятных источников заражения (вода пищевые, продукты и т.д.), т.е. определение их биовара серовара (серотипирование), :

фаговара (фаготипирование) и т.д. Кроме того, микробиологические исследования проводят для выявления носительства патогенных микробов среди детей и взрослых.

Бактериологическое исследование является ведущим в диагностике большинствабактериальных инфекций. Трудности методамогут быть связаны с низкой скоростью размножения бактерий-возбудителей, сложными ростовыми потребностями и требовательностью к условиям культивирования. Однако только выделение чистой культуры возбудителя из материала от больного при исключении контаминации имеет абсолютное диагностическое значение.

Микологические исследования осуществляют реже, чем бактериологические, поскольку микроскопическая диагностика микозов достаточно надежна. Микологические исследования являются обязательными при диагностике кандидозов, а также глубоких микозов.

Вирусологический метод является наиболее достоверным для диагностики вирусных инфекций. Однако его применение ограничивается трудоемкостью.

Особое значение вирусологический метод приобретает в случае необходимости оценкичувствительности возбудителя к противовирусным препаратам. В ряде случаев вирусологический метод используют для ретроспективной диагностики вирусных инфекций.

Все микробиологические методы имеют определяющее значение в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний, являются наиболее информативными и достоверными. К числу недостатков можно отнести длительность и отсутствие методов культивирования некоторых микробов (например, возбудителей сифилисаи лепры).

Биологические методы (биопробы ). Биопробу осуществляют путем заражения лабораторных животных материалом, полученным от больного. Этот метод применяют для выделения чистой культуры возбудителя в тех случаях, когда микроорганизмы не растут или плохо культивируются, когда микробиологические методы не дают однозначно положительного результата, а также для дифференциации патогенных микроорганизмов и определения их вирулентности. Дифференциация возбудителей основана на неодинаковой чувствительности разных лабораторных животных к определенным микроорганизмам. В настоящее время биопробы применяют только в случае крайней необходимости, что определяется в первую очередь гуманным отношением к животным, а также связано с повышенным риском заражения персоналадиагностической лаборатории.

Иммунохимические методы диагностики: (методы обнаружения антигенов возбудителя в материале от больного) Метод иммунофлюоресценции (ИФ). Дает возможность обнаружить в материале от больного антигены микроба с помощью специфических антител, меченных флюорохромами. Этот метод позволяет выявлять и идентифицировать по антигенной структуре возбудителей в материале, содержащем разнообразную микрофлору (например, в испражнениях), а также обнаруживать вирусные антигены в зараженных клетках. В настоящее время иммунофлюоресцентный метод широко применяют для обнаружения разнообразных микроорганизмов в патологическом материале.

Иммуноэлектронная микроскопия (ИЭМ). Позволяет значительно повысить чувствительность и специфичность вирусоскопического метода Исследуемый.

материал, содержащий свободные вирусные частицы, обрабатывают специфическими антителами. Образовавшиеся иммунные комплексы осаждают высокоскоростным центрифугированием и агрегаты вирусных частиц выявляют с помощью электронной микроскопии. Существуют также твердофазные методы ИЭМ: специфические антитела фиксируют на специальных сетках для электронной микроскопии, которые затем обрабатывают исследуемым материалом. Вирусные частицы специфически связываются с антителами, после чего их выявляют с помощью электронной микроскопии. В ряде случаев применяют антитела, меченные частицами золота.

Другие серологические реакции. Растворимые антигены различных возбудителей могут быть обнаружены в различных биологических жидкостях больного с помощью серологических реакций. Наиболее часто применяют иммуноферментный (ИФА) и радиоиммунный (РИА) анализ в связи с их высокой чувствительностью, реже используют методы преципитации в геле инепрямой агглютинации.

Биохимические и молекулярно-биологические методы диагностики Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Позволяет разделять сложные смеси органических соединений. Метод используют для обнаружения продуктов жизнедеятельности микроорганизмов в исследуемом материале.

Принцип метода основан на различной скорости движения соединений, растворенных в инертном газе (подвижной фазе), через разогретую колонку, заполненную жидкими смолами (неподвижная фаза). На выходе колонкиимеется детектор, регистрирующий присутствие соединения. Идентификацию веществ производят путем сравнения со стандартами.

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.