WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 24 |

А = n х sin n - показатель преломления среды;

sin – половинный угол входного отверстия объектива.

Нумерическая апертура указывается на объективе. Более сильные объективы имеют и более высокую нумерическую апертуру. Так, для малого объектива с увеличением – 9 нумерическая апертура соответствует 0,20; для сильного объектива – 90 нумерическая апертура равна 1,25.

Высокоапертурные объективы, как правило, используются в работе с высокоапертурыми конденсорами.

Величина нумерической апертуры определяет разрешающую способность объектива, которая определяется по формуле:

d= / А – длина волны света;

А – нумерическая апертура.

Разрешающая способность микроскопа представляет собой величину наименьшего диаметра частиц, которую можно видеть в микроскоп, или, другими словами, наименьшее различимое расстояние между двумя точками. Разрешающая способность не зависит от увеличения, а зависит от длины света и числовой апертуры. Сколько бы мы не увеличивали видимое изображение в микроскопе, мы не сможем увидеть дополнительных деталей рассматриваемого препарата. Улучшение разрешающей способности может быть только за счет увеличения нумерической апертуры и уменьшения длины волны света. Так, разрешающая способность светового микроскопа равна 2000А (ангстрем), электронного 10 А (ангстрем), в то время как глаз человека имеет разрешающую способность всего 0,15 мм.

Кроме разрешающей способности, объектив характеризуется определенным фокусным расстоянием и увеличением. Слабые объективы имеют большее фокусное расстояние (50-60мм), сильные – меньшее (1-3 мм).

Рабочее расстояние: расстояние от объектива до препарата. Объективам 9х; 20х; 90х соответствует расстояние 13,8; 0,6; 0,12 мм.

В связи с этим большое значение при работе с микроскопом имеет толщина покровного стекла. Нормальная толщина соответствует 0,17 мм, предметного – 1,2. Однако наблюдаются иногда отклонения от нормальной толщины стекла, с этой целью используются объективы с коррекционной оправой (с коррекционным кольцом или плавающим объективом).

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com Остаточные аберрации исправляются с помощью окуляров. Так, окуляры Гюйгенса и ортоскопические предназначены для работы с ахроматами малых и средних увеличений, планахроматами малых увеличений.

Компенсационные окуляры – с объективами апохроматами, планахроматами и ахроматами больших увеличений.

Сочетание увеличения объектива и окуляра позволяют определить общее увеличение микроскопа:

Vм=Vоб х Vок Однако нужно знать, что увеличение микроскопа находится в зависимости от длины тубуса. Нормальная длина тубуса 160 мм, но некоторые старые микроскопы имеют иную длину тубуса. При бинокулярной насадке увеличение микроскопа равно:

V = Vоб х Vок х Vn n - собственное увеличение, равное 1,5 х.

Окуляр с нужным увеличением выбирают в зависимости от увеличения объектива:

Vок=500 х А / Vоб Диафрагма служит для регулировки четкости изображения. Она бывает дисковой, колпачковой, ирисовой (у рабочих биологических, исследовательских микроскопов).

Макро- и микроскопические винты служат для фокусировки объекта.

Микровинт имеет барабан со шкалой, разделенной на 50 частей. Цена деления барабана 0,002 мм. Один оборот барабана соответствует перемещению тубуса на 0,01 мм по вертикали. Таким образом, при изучении объекта по шкале барабана можно определить его толщину.

Предметный столик может быть неподвижный (школьный микроскоп), подвижный по кругу (рабочие микроскопы), крестообразноподвижный столик с винтом и взаимно перпендикулярных линеек с нониусами, позволяющими фиксировать координаты изучаемого объекта.

Микроскоп может работать очень долго при условии правильного обращения и ухода за ним. Прежде всего, его нужно содержать в чистоте, предохранять от механических повреждений, резких колебаний температуры. Удалять пыль с оптической части можно только ваткой, смоченной бензином, или сухой кисточкой.

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com Задание 1. Ознакомиться с объективами, окулярами, конденсорами, диафрагмами рабочих, исследовательских биологических микроскопов.

2. Вычислить разрешающую способность имеющихся объективов.

3. Определить общее увеличение микроскопа МБР-1 для малого и большого увеличения.

4. Подобрать окуляры к различным объективам.

5. Взять координаты (отсчет по линейкам) для нескольких полей зрения препарата, установленного на предметный столик микроскопа МБИ-3.

6. Составить описание микроскопов следующих марок: МБР-1;

МБИ-3; МБИ-6; МБС-1; МЛ-2; УЭМБ- 100Б.

Материалы и оборудование Микроскопы: школьный, МБР-1, МБИ-3, МБИ-6, МС-51, МЛ-2. Набор окуляров, набор объективов. Ящик для упаковки микроскопа, препарат, масло для иммерсии.

Дополнительные приборы к микроскопу Для расширения возможностей цитологических, эмбриологических и гистологических исследований сконструировано и применяется в работе большое количество дополнительных приборов и принадлежностей к микроскопам.

Для изучения препаратов огромное значение имеет источник света.

В практической работе с микроскопом гораздо удобнее пользоваться искусственным источником света, который отличается от дневного тем, что более постоянен и даёт возможность добиться большей освещенности изображения. В качестве искусственного источника света используются осветители ОИ – 31, ОИ–19 и ОИ–9м. Они имеют электрическую лампочку, заключенную в светопроницаемый кожух, коллектор, диафрагму, светофильтр. Для удобства осветитель крепиться на штативе и располагается от зеркала на определенном расстояние.



PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com Рис. 7. Осветитель 0И-9м с трансформатором:

1 - планка для соединения с микроскопом; 2 - основание осветителя; 3 - корпус;

4 - стойка; 5 - зажимное устройство; 6 - ирисовая диафрагма; 7 - трансформатор;

8 – тумблер для включения лампы осветителя; 9 – реостат для регулирования накала лампы.

Наиболее равномерное освещение поля зрения достигается при установке света по правилу Келлера, которое заключается в том, что апертура коллектора, осветителя, конденсора и объектива должны быть равными между собой. Так объективы больших увеличений требуют использования конденсора с апертурой не меньше 1,4; для малых объективов достаточна апертура 0,3.

Рисовальный аппарат. Рисовальный аппарат применяется с целью зарисовки всего изучаемого объекта и отдельных его участков. Наиболее распространенными рисовальными аппаратами являются: РА-4; РА-6; РА5.

Рис. 8. Рисовальные аппараты:

РА-4 (А): 1 - хомутик: 2 - сектор со светофильтрами; 3 - откидная оправа с призмойкубиком; 4 - штанга; 5 - зеркало; рисовально-проекционный аппарат РА-6 (В); 1 - кольцо для изменения увеличения: 2 - кольцо для фокусировки карандаша; 3 - кольцо для перехода от изображения на экран к зарисовке и обратно; 4 - головка с зеркалом.

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com Рисовальный аппарат РА–4 крепится на тубусе микроскопа с помощью хомутика. Благодаря наличию призмы-кубика и зеркала, изображение объекта видно через окуляр на бумаге, приготовленной для рисования.

Контур объекта обводится карандашом, который также при этом хорошо виден.

Основным условием нормальной работы рисовального аппарата является одинаковое и достаточно интенсивное освещение препарата и бумаги на рисовальном столике, при этом плоскость столика должна быть перпендикулярной по отношению к оси тубуса. Изображение на бумаге получается увеличенным, т.к. ход лучей от призмы-кубика и от середины зеркала и до поверхности бумаги больше 25 см, но такое увеличение не отражается на качестве рисунка.

РА–5 позволяет изучить объект непосредственно на экране, который можно либо зарисовать, или получить изображение на фотобумагу. Работа при этом проводится в темной комнате. По конструкции РА-5 отличается от РА-4 лишь тем что мы не получаем изображение в глаз, оно отбрасывается через окошечко на зеркало, а от зеркала на бумагу или экран.

Рисовальный аппарат РА-6 применяется для зарисовки и проектирования изображения на экран. Так же, как и в РА-4 здесь можно видеть одновременно препарат, лист бумаги и кончик карандаша во время зарисовки. При включении другой призмы с помощью кольца 3 можно спроецировать объект на экран. РА – 6 устанавливается между тубусодержателем и тубусом микроскопа.

Приспособления для измерения микроскопических объектов.

В исследованиях часто возникает необходимость в измерении изучаемых объектов. С этой целью применяются специальные измерительные линейки, нанесенные на круглые стеклянные пластинки, которые вставляются между глазной и собирательной линзами окуляра. Такая измерительная линейка получила название окуляр-микрометра. Для измерения необходимо совместить шкалу окуляр-микрометра с измеряемым объектом, полученное количество делений умножить на цену деления. Но цена деления окуляр-микрометра – величина непостоянная и определяется для конкретного сочетания увеличения объектива и окуляра. Цена деления окуляр-микрометра определяется с помощью объект-микрометра, цена деления которого известна. Объект-микрометр типа ОМП имеет шкалу, нанесенную на поверхность стеклянного кружка, который заделан в металлическую оправу, размеры которой одинаковы с предметным стеклом. Для определения цены деления окуляр-микрометра на предметный столик устанавливают объект-микрометр. После совмещения измерительных линеек окуляр и объект-микрометра подсчитывают количество делений на линейке объект-микрометра и окуляр-микрометра. Затем делят первое на второе, умножают на цену деления объект-микрометра, которая равна 0,01 мм или PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com 10 мк и получают цену деления окуляр-микрометра для заданного сочетания окуляра и объектива.

Ц = А х 10/ Б, где А – количество делений объект-микрометра Б – количество делений окуляр-микрометра 10 мк – цена деления объект-микрометра Задание 1. Ознакомиться с принципом устройства осветителей, рисовальных аппаратов, объект- и окуляр– микрометра.

2. Сделать рисунки с помощью рисовального аппарата РА - 4, РА - 6.

3. Определить цену деления окуляр-микрометра для комбинации окуляра и объектива 15х40; 10х40.

Материалы и оборудования 1. Микроскопы МБР-1А; МБИ-3.

2. Осветители ОИ-19; ОИ-9м.

3. Объект-микрометр, окуляр-микрометр.

4. Рисовальные аппараты РА–4; РА–5; РА–6.

5. Постоянные препараты, карандаши, бумага.

Тема 2. Методика приготовления постоянных микротомных препаратов Программа занятий по цитологии растений предусматривает ознакомление студентов с важнейшими методами исследования клеточных структур, приготовлением цитологических и эмбриологических препаратов, изучением клеточных структур, кариотипов, процессов митоза, мейоза, оплодотворения и т.д.

Одним из методов исследований в цитологии и эмбриологии является фиксация с последующим окрашиванием тканей и клеток. Этим методом можно готовить постоянные и временные препараты.





Занятие I. Ознакомление с методикой приготовления постоянных микротомных препаратов Техника приготовления постоянных окрашенных микротомных препаратов для растений введена ботаником В.И. Беляевым. Для микротомных препаратов готовятся срезы с помощью микротомов. На рисунке 9, представлены: ратационный и салазочный микротом.

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com Рис. 9. Микротомы: слева - ротационный; справа - салазочный.

Постоянные микротомные препараты могут долго храниться не изменяясь. Использование для препаратов микротомных срезов толщиной 10 –20 мкм позволяет изучить митоз, мейоз, микро-, макроспорогенез, процесс оплодотворения и т.д.

Последовательность обработки материала при приготовлении постоянных препаратов приводится по В.Н. Юрцеву (1961):

1. Подготовка материала к фиксации.

2. Фиксация материала водными или спиртовыми фиксаторами в зависимости от вида приготавливаемых препаратов.

3. Промывка материала.

4. Обезвоживание.

5. Пропитывание материала растворителями парафина.

6. Пропитывание парафином.

7. Заливка материала в парафин.

8. Изготовление блоков из материала, пропитанного парафином.

9. Приготовление срезов с помощью микротома.

10. Наклейка срезов на предметное стекло.

11. Просушивание наклеенных препаратов в термостате.

12. Удаление парафина из срезов ксилолом, толуолом.

13. Удаление ксилола из срезов спиртом.

14. Удаление спирта из срезов дистиллированной водой.

15. Протравливание срезов квасцами.

16. Окрашивание препаратов.

17. Обезвоживание окрашенных препаратов спиртом.

18. Замещение спирта в срезах ксилолом.

19. Наклейка покровного стекла канадским бальзамом (заключение срезов в канадский бальзам).

20. Просушивание срезов и подчистка.

21. Этикетирование препаратов.

22. Изучение под микроскопом.

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com Каждый этап обработки материала требует определенных условий во времени, используемых материалов для обработки. На занятии преподаватель очень подробно демонстрирует все последовательные операции приготовления постоянных микротомных препаратов, знакомит с необходимым оборудованием и литературой.

Занятие 2. Выполнение работ по приготовлению постоянных микротомных препаратов Для того чтобы хорошо усвоить все операции по приготовлению постоянных препаратов студенты самостоятельно выполняют лишь некоторые операции, требующие определенных навыков в работе, это: подготовка материала, фиксация его, приготовление блока, резка на микротоме, расправление срезов на предметном стекле и наклейка.

Цель занятия: получить навыки по выполнению наиболее трудных операций по приготовлению постоянных препаратов.

Методические рекомендации I. Фиксация материала С целью умертвления объекта с сохранением его прижизненной структуры проводится фиксация объекта (корешки гороха и лука) в фиксаторе Левитского (хромовая кислота 1% + формалин 10% в равных соотношениях по 2,5мл.). Длина корешков 0,5 – 0,7 см.

II. Приготовление блоков (методом закапывания) Выплавить объект (корешок) из парафиновой заливки горячей препаровальной иглой, приклеить на кончик иглы. Поверхность деревянного держателя нагреть над спиртовкой и при помощи парафиновой палочки на теплую поверхность нанести каплю жидкого парафина, затем без перерыва следующую и т.д., пока возвышение будет 3 – 4 мм. Приготовленный заранее объект перенести на возвышение и подогретой иглой установить вертикально (корешок устанавливают чехликом вверх). Продолжить закапывание горячим парафином, пока над объектом слой парафина не будет равен 3 мм.

Опустить блок в холодную воду, после остывания его обрезать лезвием безопасной бритвы в форме правильного параллелепипеда, снять сверху лишний парафин, так чтобы остался слой 2 мм.

III. Приготовление микротомных срезов Приготовить микротомные срезы толщиной в 10 микрон, при этом ленту с ножа следует снимать мягкой кисточкой и укладывать на чёрную бумагу в чашку Петри блестящей стороной вверх.

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com IV. Наклейка парафиновых срезов на предметное стекло Предметное стекло положить на трафарет. На поверхность предметного стекла из капельницы нанести несколько капель дистиллированной воды и распределить её по месту покровного стекла. Лента укладывается на место покровного стекла перпендикулярно длинной стороне предметного стекла блестящей стороной к воде. Над пламенем спиртовки, осторожно подогревая, расправить сморщенные парафиновые срезы. После расправления срезов излишки воды удалить фильтровальной бумагой.

Материалы и оборудование 1. Для фиксации: фиксатор, мерные цилиндры, бюксы, проросшие семена или луковицы лука, этикетки.

2. Для приготовления блоков: подставки для блоков, парафиновые палочки, спиртовки, ванночки с водой, заливки (корешки в парафине), препаровальные иглы.

3. Для приготовления срезов: микротомы, чашки Петри с черной бумагой, кисточки.

4. Для расправления срезов на стекле: предметные стекла, трафареты для укладки ленты на предметное стекло, капельницы с водой.

Все материалы готовятся на каждого студента.

Тема 3. Самостоятельная работа по составлению календарного плана.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 24 |










© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.