WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 || 8 | 9 |   ...   | 11 |

Результаты исследований: у 85-95% больных ИБС, стенокардией II ФК - III ФК всех возрастных групп регистрируется токсичность плазмы крови. Среднее значение процента подвижных в электрическом поле клеток спирулины и амплитуды их колебания у пациентов среднего и пожилого возраста одинаково снижены, и еще более уменьшаются у больных старческого возраста (р<0,01). Между возрастом пациентов и уровнем токсичности плазмы крови регистрируется слабая обратная связь (R= -0,22; t= -2,18; p<0,05). Нарушение электрофоретической активности эритроцитов выявляется у 30% больных ИБС среднего возраста и у 61-73% больных пожилого и старческого возраста. Среднее значение процента подвижных в электрическом поле эритроцитов у пациентов среднего возраста находится в пределах нормы и снижается у пациентов пожилого и старческого возраста (р<0,001). Средний показатель амплитуды движения эритроцитов у больных среднего и пожилого возраста ниже нормы и еще больше уменьшается у больных старческого возраста (р<0,05). Между возрастом пациентов и процентом подвижных в электрическом поле эритроцитов регистрируется тенденция к обратной связи (R= -0,16; t= 1,51; p<0,2).

Электрофоретическая активность клеток спирулины и эритроцитов зависит от уровня некоторых метаболитов, определяемых при биохимическом исследовании. Токсичность плазмы крови выше у пациентов с уровнем глюкозы более 5,5 ммоль/л, мочевины более 8,ммоль/л и лактатдегидрогеназы более 410 ЕД/л. Увеличение в сыворотке крови активности щелочной фосфатазы более 70 ЕД/л и креатинфосфокиназы более 190 ЕД/л угнетает электрофоретическую подвижность эритроцитов, в то время как повышение концентрации холестерина более 5,5 ммоль/л и фибриногена более 4,0 г/л увеличивает ее.

Ранговый корреляционный анализ по Спирмену подтверждает наличие прямой связи между процентом подвижных эритроцитов и концентрацией холестерина (R= 0,34; t= 3,48; p<0,05) и фибриногена (R= 0,32; t= 2,66;

p<0,05).

Возрастное нарастание интоксикации не связано с метаболическими изменениями в крови, поскольку биохимические показатели, влияющие на электрофоретические характеристики клеток спирулины, у больных ИБС разного возраста не различаются. Одной из причин уменьшения мембранного потенциала эритроцитов у больных пожилого возраста может быть регистрируемое у них по сравнению с больными среднего возраста снижение концентрации холестерина (р<0,05). Уменьшение амплитуды движения эритроцитов у больных старческого возраста возможно связано со снижением концентрации фибриногена, наблюдаемым у них по сравнению с пациентами среднего и пожилого возраста (р<0,05).

Медовый В.С.

РОБОТИЗИРОВАННАЯ МИКРОСКОПИЯ ВНЕДРЯЕТ НОВЫЙ СТАНДАРТ КАЧЕСТВА МЕДИЦИНСКИХ АНАЛИЗОВ КЛЕТОК И ТКАНЕЙ ЗАО «Медицинские компьютерные системы (МЕКОС)», Москва Полученные в микроскопе изображения позволяют оценивать недоступную проточным анализаторам тонкую морфологию клеток, имеющую важное диагностическое значение. В текущем десятилетии на рынке появились комплексы автоматизированной микроскопии (КАМ) с роботизированными функциями визуальных анализов биоматериалов, частично или полностью заменяющие глаза и руки врача.

Востребованность роботизированного КАМ (РКАМ) связана с серьезными недостатками ручной микроскопии, не позволяющими в массовых масштабах обеспечить необходимую точность и полноту анализов.

Создание РКАМ является сложной задачей из-за высокой изменчивости состава и большого объема микроскопических препаратов, разнообразия объектов анализа и фона, а также из-за природы определения анализируемых объектов через визуальные качественные термины, часто не имеющие ясного количественного эквивалента.

РКАМ автоматизирует процесс сбора выборки и сортировки клеток препарата, в частности, мазка крови, заменяя в этом процессе глаза и руки врача. Сбор выборки, связанный с навигацией, перемещением препарата, фокусировкой, сменой объективов, обнаружением и сбором выборок клеток, контролем качества препарата выполняется в соответствии с максимальными рекомендациями современных руководств, как известно, недостижимыми в рядовой лаборатории при ручной микроскопии. В то же время качество оценки атипичной морфологии, сортировки юных и патологических форм клеток в собранной выборке по типам в современных РКАМ уступают возможностям зрительного анализатора опытного врача-лаборанта. Поэтому РКАМ работают в режиме «поддержки» визуального анализа атипичной морфологии. Избавляя врача от изнурительной микроскопии и обеспечивая комфортабельное рабочее место, РКАМ сортирует автоматически собранную выборку клеток по нормальным типам и по небольшому числу других типов, собирая атипичную морфологию на экране для дополнительного визуального анализа. Указанные полные рекомендации выполнения микроскопического цитоанализа, максимизирующие диагностическую значимость, становятся требованиями стандарта качества, применимого в рутинной практике обычной лаборатории.

РКАМ позволяет выполнять недостижимые раньше анализы больших выборок, таких как анализ лимфоцитограммы на базе 2-3 тысяч клеток.

КАМ внедряют также производство виртуальных слайдов (цифровых копий) препаратов. Если скорость производства виртуальных слайдов (ВС) достаточна на потоке, этот базовый информационный элемент современной микроскопии может применяться для стандартизации анализа. ВС, записанный в базу данных или переданный по линиям связи, может использоваться для более быстрого и тщательного по сравнению с прямой микроскопией визуального анализа врачом на отдельном, в том числе удаленном, компьютере. Увеличение скорости и тщательности связано со значительным преимуществом в навигации, в скорости изменения увеличения, автоматическим выбором для первичного просмотра наиболее контрастного фокусного слоя в каждом поле зрения трехмерного ВС. Архивы ВС используются для формирования представительных выборок в задачах количественной диагностики и для обучения программ РКАМ. Терминология визуального определения нормальных и патологических типов клеток и тканей рассчитана на зрительный анализатор среднестатистического врача-лаборанта. Ее сформировали ведущие специалисты, имевшие в отсутствии информационных технологий ограниченный материал исследований.

Технологии РКАМ могут вдохнуть новую жизнь в эту весьма консервативную область исследований.

Мельникова В.Ю., Самородов А.В.

ЦИТОМОРФОМЕТРИЯ В ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ РЕАКТИВНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ПОЧЕЧНОГО ЭПИТЕЛИЯ И РАКА ПОЧКИ.

МНИОИ им. П.А.Герцена, г. Москва, МГТУ им. Н.Э.Баумана, Москва.

Дифференциальная цитологическая диагностика реактивных изменений почечного эпителия и рака почки нередко бывает затруднена из-за отсутствия четких морфологических критериев, позволяющих констатировать наличие или отсутствие злокачественной трансформации клеток. Трудности рутинной цитологической диагностики опухолей почки диктуют необходимость поиска новых методов уточняющей диагностики.

В последнее время в цитологии широкое применение получил метод определения функционального состояния клеток с помощью оценки активности областей ядрышкового организатора, которая отражает метаболическую и пролиферативную активность клеток, а также является маркером злокачественной трансформации.

Цель нашего исследования – разработка дифференциальнодиагностических цитологических критериев реактивных изменений почечного эпителия и высокодифференцированного почечно-клеточного рака на основе исследования морфологических характеристик ядра и количественной оценки ядрышково-ядерного отношения площадей.

Материалом исследования послужили цитологические препараты от 40 больных с реактивными изменениями почечного эпителия и высокодиффернцированного почечно-клеточного рака (РИ - 20, ПКР- 20).

Для окраски цитологических препаратов применялась методика серебрения кислых негистоновых белков ядрышкообразующих регионов хромосом, позволяющая выявлять их в виде аргентофильных гранул.

Данная методика основана на отличительной способности негистоновых белков окрашиваться серебром.

Изображения этих препаратов были введены в компьютер при помощи анализатора изображений.

Результаты исследования: морфологическая характеристика ядер и ядрышек реактивно измененного почечного эпителия имеет ряд отличительных признаков. В реактивно измененных клетках ядра представляются небольшими одноморфными, преимущественно округлой, овальной формы, располагаются, как правило, в центре клетки и имеют равномерный сетчатый хроматин, количество гранул серебра не превышает два на ядро. При ПКР ядра небольших размеров, но гиперхромны, с тяжистым рисунком хроматина. Преобладают клетки с умеренным и высоким содержанием гранул серебра – три и более.

Проведение морфометрических исследований позволило объективизировать данные цитологического исследования. Существуют значимые различия в ядрышко-ядерном отношении, то есть в отношении площадей ядрышек и ядер, при реактивных изменениях почечного эпителия и высокодифференцированном почечноклеточном раке:

ядрышко-ядерное отношение площадей составили соответственно 0,05 - 0,07 в группе реактивных изменений и 0,11 – 0,15 в группе высокодифференцированного почечно-клеточного рака (р < 0.05).

Таким образом, показано статистически достоверное различие ядрышко-ядерного отношения площадей реактивных изменений почечного эпителия и высокодифференцированного почечно-клеточного рака, а данное исследование может быть рекомендовано как объективный метод для дифференциальной диагностики реактивных изменениях почечного эпителия и почечно-клеточного рака в трудных для морфологической диагностики наблюдениях.

Метелин В.Б., Василенко И.А., Щербакова Э.Г., Воробьева Л.С.

ТЕСТИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НАНОЧАСТИЦ С УЧЕТОМ ИХ АДРЕСНОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА КЛЕТКИ-МИШЕНИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ Российская медицинская академия последипломного образования, Москва Повышенный интерес специалистов к частицам нанометрового размера объясняется тем, что изменение дисперсности, то есть степени раздробленности вещества, может приводить к заметным изменениям их физико-химических свойств: адгезивности, аб- и адсорбционной активности, структурируемости, взрывоопасности, токсичности и т.п..

Увеличение отношения площади поверхности к объему наночастиц приводят к их способности более интенсивно взаимодействовать с окружающей средой. Поэтому актуальной и важной является проблема создания унифицированной технологии для оценки биоактивности наноструктурированных веществ в режиме реального времени с учетом особенностей их химического состава, способов доставки к клеткаммишеням, характера взаимодействия с молекулярно-клеточными структурами и выявления потенциальной опасности для здоровья человека и животных.

Мы попытались оценить влияние нанопорошков вольфрама на Тлимфоциты периферической крови человека в условиях эксперимента in vitro, используя возможности компьютерной фазово-интерференционной микроскопии (КФМ) живых клеток.

Объектом для исследования служили Т-лимфоциты периферической крови здоровых добровольцев. Тестировали промышленно выпускаемый вольфрам в виде порошков с размером частиц 1,2 мкм (W) и 60 нм (наноW60), последний получали плазменным методом. Порошки разводили в среде 199, добавляли к взвеси клеток в конечной концентрации 5мг/мл и инкубировали при температуре 37°С в течение 45 минут. Контролем служили интактные клетки доноров.

Исследование морфофункционального состояния Т-лимфоцитов проводили на базе отечественного компьютерного лазерного фазовоинтерференционного микроскопа Цитоскан (МГИРЭА, Москва).

Оценивали геометрические (диаметр (D), периметр (P), площадь (A)), и фазовые (высота (H), объма (V)) показатели каждой клетки и всей выборки. Статистический анализ экспериментальных и клинических данных проводили с помощью алгоритмов среды MatLab и математического пакета "Statistica 6".

В исследованиях in vitro были получены доказательства, что КФМ позволяет выявить детальные изменения фазовых параметров лимфоцитов, непосредственно связанные с уровнем их функциональной активности.

Так, средние в анализируемой популяции морфометрические параметры Т-лимфоцитов в контрольной группе составили 7,1±1,5 мкм, 20,8±4,0 мкм, 2,1±0,4мкм, 31,5±13,5мкм2, 32,2±15,3мкм3, D, P, H, A, V, соответственно. После инкубации с порошком W показатели Т-клеток оказались 6,8±1,0 мкм, 19,5±3,0 мкм, 2,4±0,4мкм, 28,1±10,9мкм2, 33,1±12,1мкм3, соответственно; а при воздействии W60 - 6,5±1,7 мкм, 19,0±4,2 мкм, 2,4±0,4мкм, 26,4±12,9мкм2, 28,6±13,9мкм3, соответственно.

При разделении клеток на различные подгруппы по величине их фазовой высоты (<2,0 мкм; >2,0<2,5 мкм, >2,5<3,0 мкм, >3 мкм) установлено, что в популяции интактных Т-лимфоцитов процент клеток с соответствующими значениями Н составляет 51,6%, 29,0%, 16,1%, 3,3%.;

после инкубации с W – 11,9%, 52,4%, 26,2% и 9,5%, а после инкубации с нано-W60 – 28,6%, 42,9%, 23,8% и 4,8% соответственно. Следовательно, под влиянием порошков W в популяции Т-лимфоцитов в резко снижается содержание наиболее активных клеток с минимальной высотой (Н <2,мкм) и увеличивается процент лимфоцитов с Н>3 мкм.

Известно, что ядерный хроматин способен к сложным структурным превращениям, изменяющим его физико-химические свойства. При этом такие параметры, как рефрактерность, анизотропия отражают его структурную упорядоченность. Снижение значения коэфициента преломления может свидетельствовать о явлениях деспирализации хроматина, сопровождающихся ослаблением химических связей комплекса ДНК – гистон в ядре клетки. Данный факт указывает на биологическую активацию хроматина - предпосылку матричной активности ДНК. И наоборот, при снижении активности клетки в ядре происходит перераспределение и уплотнение хроматина, заметное увеличение его рефрактерности. Таким образом, фазовая высота – объективный количественный параметр, позволяющий оценить процесс изменения функциональной активности лимфоцитов.

Полученные результаты позволяют рассматривать наночастицы вольфрама в качестве активных иммуносупрессоров, причем эффект супрессии более выражен при воздействии наночастиц.

Потапова С.Г., Мукова Л.А., Пронин В.Ю., Шишина Р.Н.

РЕЗУЛЬТАТЫ КОМПЬЮТЕРНОЙ ЭРИТРОЦИТОМЕТРИИ ПРИ МАКРОЦИТАРНОЙ АНЕМИИ ФГУ РГНКЦ Росздрава, Москва Морфологические особенности эритроцитов, определяемые в окрашеных мазках периферической крови, размеры, форма, степень насыщенности гемоглобином, являются важными показателями для установления патогенеза анемии. Цель настоящей работы: определение дополнительных диагностических факторов макроцитарных анемий (В12 - фолиево- дефицитной анемии) на основе компьютерного морфометрического анализа эритроцитов периферической крови. Перед нами стояла задача получить объективные количественные характеристики эритроцитов периферической крови при В12 (фолиево)-дефицитной анемии путем компьютерного изучения клеточного изображения и выделить признаки мегалобластического кроветворения.

Материалом исследования являлись эритроциты периферической крови 24 пациентов в возрасте старше 60 лет с В12-дефицитной анемией до лечения и в период ретикулоцитарного криза на 7 день терапии витамином В12 и 8 пациентов с нормальными показателями уровня гемоглобина, количества эритроцитов (контрольная группа). Тонкие мазки крови были окрашены по общепринятой методике. Исследовано эритроцитов.

Морфометрические измерения проводились на отечественном анализаторе клеточного изображения «АСПЕК» по программе «сегментация клетки» (исследовательская версия), под контролем исследователя. По результатам сегментации автоматически определялись размеры эритроцита: площадь, периметр, a,b-величины большого и малого радиуса; фактор формы эритроцита, f= ; содержание гемоглобина в эритроците.

В результате проведенного исследования установлены:

объективные количественные критерии морфологических маркеров В12–дефицитной анемии в периферической крови - макроцитоза, гиперхромии и изменения формы эритроцитов. Большая часть эритроцитов представлена макроцитами - 73,27±3,6% против 11,54±1,80% контрольной группы (t15,3500p<0,001); их площадь 63,14±0,74мкм2, периметр30,32±0,16мкм, фактор формы 1,0025±0,0004 значимо больше соответствующих параметров макроцитов контроля соответственно, 53,7±0,15мкм(t12,4619p<0,001); 27,9±0,12мкм (t12,0486p<0,001); 1,0003±0,(t3,6961p<0,001). Среднее содержание гемоглобина в макроцитах составляло 48,88±1,29пг (контроль 36,48±0,9пг, t 7,9041p<0,001).

Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 || 8 | 9 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.