WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 11 |

Для того чтобы выяснить, является ли аномальная локализация Аантигена предвестником апоптотической гибели клеток, была изучена структура актинового цитоскелета, которая обычно меняется в процессе апоптоза. Для этого клетки c нуклеоплазматической локализацией Аантигена окрашивали родамин-фаллоидином, выявляющим актиновые микрофиламенты. Это позволило выявить в этих клетках разрушение актинового цитоскелета в цитоплазме, заключающееся в укорочении пучков микрофиламентов с одновременным увеличением количества стресс-фибрилл, расположенных над зоной ядра, что характерно для начальной стадии апоптоза. Таким образом, было выявлено, что после воздействия ингибиторов белкового синтеза в клетке происходит не только миграция ядрышкового белка А3 в нуклеоплазму, но и значительные изменения в организации актинового цитоскелета, что является начальным признаком апоптотической гибели клеток. Это позволило считать нуклеоплазматическую локализацию А3 антигена начальной стадией апоптоза.

Работа поддержана грантом РФФИ 08-04-13683-офи_ц Житняк И.Ю., Васильев Ю.М., Глушанкова Н.А.

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ КЛЕТОК НА ЭТАПАХ ОНКОГЕННОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ НИИ Канцерогенеза Российского онкологического научного центра им.

Н.Н. Блохина РАМН, Москва Важнейшей характеристикой клеток злокачественных эпителиальных опухолей является эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП), который заключается в приобретении эпителиальной клеткой фибробластоподобного фенотипа и способности к индивидуальной миграции по поверхности подлежащего матрикса.

В нашей работе были исследованы различные этапы ЭМП в культуре эпителиальных клеток линии IAR-2, выделенных из печени крысы. Нами были получены линии эпителиальных клеток IAR-2, конститутивно экспрессирующих экзогенный активированный онкоген NrasAsn12, проявляющие различную степень трансформированности.

Морфометрические и иммуно-флуоресцентные исследования показали, что полученные линии клеток по степени морфологических изменений могут быть разделены на две группы и могут рассматриваться в качестве модели морфологических изменений на этапах ЭМП, вызываемого онкогенной трансформацией.

К первой группе (IAR-2 Ras 1170) были отнесены пять линий клеток, находящиеся на ранних этапах морфологической трансформации.

Одиночные клетки имеют полигональную форму, площадь одиночных клеток меньше, чем нормальных эпителиоцитов. Такие клетки в густой культуре способны организовывать монослой, но в этих монослоях наблюдаются обширные перекрывания ламелл. На ранних этапах трансформации эпителиоциты начинают экспрессировать мезенхимальный тип кадхеринов - N-кадхерин. Межклеточные адгезионные контакты между такими клетками образованы N- и Е-кадхерином. При трансформации также изменяется пространственная организация адгезионных контактов. Наблюдаются прерывистые, точечные, а также короткие радиальные контакты, тогда как нормальные эпителиоциты формируют тонкие непрерывные тангенциальные контакты. Клетки IAR-Ras 1170 теряют способность формировать кольцевой актиновый пучок.

Линии клеток второй группы (IAR-2 Ras 1162) характеризуются более высокой степенью трансформированности. К этой группе были отнесены девять клонов. Клетки имеют фибробластоподобную форму, площадь их значительно меньше, по сравнению с контрольными эпителиоцитами. В густых культурах такие клетки не образуют монослой, преобладают подползания клеток друг под друга. Для клеток с высокой степенью трансформации характерно прекращение экспрессии эпителиального Е-кадхерина, межклеточные адгезионные контакты образованы только N-кадхерином. Клетки IAR-2 Ras 1162 формируют радиальные межклеточные адгезионные контакты, характерные для фибробластов.

Трансфекция в клетки с высокой степенью трансформированности плазмиды, содержащей кДНК гена Е-кадхерина CDH1, способствовала частичному восстановлению эпителиального фенотипа трансформированных клеток. Видеомикроскопические исследования поведения клеток в системе широкой раны показали, что клетки, экспрессирующие экзогенный Е-кадхерин, в отличие от исходных высокотрансформированных клеток, способны двигаться в рану, не отрываясь друг от друга.

Таким образом, нами были получены серии линий трансформированных эпителиальных клеток IAR-2 с различной степенью морфологических изменений. Было обнаружено, что на ранних этапах ЭМП происходит изменение формы клеток, разрушение кольцевого актинового пучка, изменение пространственной организации межклеточных адгезионных контактов, а также спектра экспрессируемых кадхеринов, что влияет на локомоторную активность клеток и межклеточные взаимодействия.

Игнатьев П.С., Индукаев К.В., Лопарев А.В., Осипов П.А.

НОВОЕ ПОКОЛЕНИЕ ЛАЗЕРНЫХ МИКРОСКОПОВ ДЛЯ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ООО «Лаборатории Амфора», г. Москва На базе оригинальной технологии Модуляционной Интерференционной Микроскопии (МИМ) разработан прибор третьего поколения МИМ-310. Отличительной особенностью от предыдущего поколения является высокая скорость получения изображений - 0,3 с.

Уникальные технические характеристики микроскопа (сверхразрешение:

20-100 нм в плоскости XY и 0,5 нм по оси Z, чувствительность к нанодинамике и высокая скорость ввода изображений) позволяют проводить неинвазивные исследования биологических объектов по их фазовым портретам.

Уникальная функция регистрации нанодинамики в сочетании с высоким пространственным и временным разрешением открывает новые перспективы в исследовании динамики внутриклеточных процессов.

МИМ 310 – новый уникальный инструмент для диагностики на клеточном уровне.

Фазовая микроскопия – перспективное и быстро развивающееся направление, имеющее ряд преимуществ перед традиционными методами микроскопии. В микроскопах МИМ-310 успешно реализованы основные концепции количественной фазово-поляризационной микроскопии.

Уникальные технические характеристики МИМ-310 позволяют исследовать широкий класс биообъектов от клеток крови и тканей до субклеточных структур. Количественный характер получаемой информации, дает достоверную оценку морфологических и динамических параметров исследуемых объектов. Возможность управления поляризацией излучения позволяет регистрировать оптически активные (анизотропные) области клетки.

ИССЛЕДОВАНИЕ КЛЕТОК КРОВИ Пространственное сверхразрешение МИМ-310 в сочетании с высокой чувствительностью к оптическим свойствам объекта позволяет точно регистрировать слабые изменения показателя преломления живой клетки. Эта особенность широко используется для изучения фазовой микроморфологии эритроцитов и получения количественных данных о распределении показателя преломления гемоглобина. Известно, что при целом ряде заболеваний происходит изменение оптических и морфологических свойств эритроцитов. МИМ-310 позволяет идентифицировать фазовые портреты различных форм эритроцитов, зарегистрировать изменения фазового объема эритроцитов и показателя преломления гемоглобина при различных воздействиях, а также локализовать нанометровые флуктуации оптической разности хода (ОРХ) на различных участках эритроцита.

ФАЗОВЫЕ И ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ ИЗОБРАЖЕНИЯ КЛЕТКИ Сопоставление фазовых изображений клетки с изученными флуоресцентными изображениями существенно облегчает интерпретацию фазовых изображений. На примере изображений нейрона показано, что флуоресцирующие цитоплазматические гранулы соответствуют областям с большей оптической плотностью. Исследование нанодинамики нейрона позволило обнаружить локальные флуктуации ОРХ с амплитудой менее нм в примембранной области нейрона. МИМ позволяет исследовать нейрон без флуоресцентных красителей, не нарушая естественного функционирования клетки.

РЕГИСТРАЦИЯ НАНОДИНАМИКИ НЕРВНЫХ ВОЛОКОН Регистрация нанодинамики биообъектов - уникальная возможность нового поколения микроскопов МИМ 310. В сочетании с современными алгоритмами обработки сигналов, такими как Wavelet анализ, МИМ-открывает новые возможности в исследовании внутриклеточной динамики. Исследование динамики миелина в нервных волокнах позволяет диагностировать нарушения деятельности ЦНС.

Кардашова З.З., Григорьев Г.И.

БИОРЕВИТАЛИЗАЦИЯ: РОЛЬ ПРЕПАРАТОВ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ В СТИМУЛЯЦИИ ФИБРОБЛАСТОВ КОЖИ ФГУ Российский геронтологический научно-клинический центр Росздрава, г. Москва ООО «Амалайн», г. Москва Одной из основных причин старения кожи является снижение пролиферативной и синтетической активности фибробластов – клеток среднего соединительнотканного слоя кожи, называемого дермой.

Особенно быстро утрачивается их способность к синтезу межклеточного вещества, окружающего клетки и влияющего на их активность. При этом главной составляющей внеклеточного матрикса является гиалуроновая кислота (ГК), которая играет поистине уникальную роль в жизни клеток кожи, участвуя в процессах регуляции клеточной пролиферации и миграции, регенерации тканей, ангиогенеза и водного баланса дермы.

Поэтому увеличение количества гиалуроновой кислоты может способствовать, с одной стороны, повышению выживаемости фибробластов, с другой – улучшению состояния и увлажнению кожи.

Биоревитализация – это терапевтическая процедура, представляющая собой метод интрадермальных инъекций биосинтезированной гиалуроновой кислоты и гарантированно запускающая механизмы обновления и омоложения клеток кожи, не истощая при этом ее ресурсы. Методика позволяет воссоздать благоприятные и, главное, физиологические условия реабилитации кожи, улучшая ее тонус и эластичность. Отличительными особенностями препаратов линии "Амалайн", используемых нами для биоревитализации кожи, являются длина молекул ГК 2,5-3,5 MDa, неаллергенность (ГК неживотного происхождения), наличие эффекта антиоксиданта (не дает сильного отека), высокая пластичность, отсутствие признаков воспаления и уплотнения кожи вокруг места инъекции, управляемая биодеградация, удобство транспортировки и хранения.

Безвредность препарата доказана доклиническими и клиническими испытаниями в Российском научном центре хирургии им. Акад. Б.В.

Петровского РАМН, ФГУП "Институт Пластической Хирургии и Косметологии МЗ РФ, Центральной клинической больнице РАМН, Российской Медицинской Академии Последипломного Образования, НИИ Клинической Иммунологии.

Интерстициальный объем в месте введения препарата Amaline ("Амалайн") обеспечивается молекулами воды, связанными с молекулами гиалуроновой кислоты. Для увеличения объема кожи в области морщин и складок следует инъецировать высокомолекулярную гиалуроновую кислоту (2,5-3,5 MDa), которая, подвергаясь деградации, запускает процесс эндогенного синтеза полисахаридов и структурных белков - коллагена и эластина - фибробластами кожи.

Гиалуроновая кислота является основным структурным элементом протеогликанов. Именно этот полианион обладает уникальными гигроскопичными свойствами: одна молекула гиалуроновой кислоты может связывать 200–500 молекул воды. Благодаря наличию в молекуле гиалуроновой кислоты гидрофильных и гидрофобных участков, формируется «завитая» лента. Цепи гиалуроновой кислоты находятся в постоянном движении, создавая петли (домены) разной величины.

Молекулы воды, электролитов и других небольших водорастворимых соединений свободно перемещаются внутри доменов, тогда как крупные белки могут задерживаться в них. Следовательно, гиалуроновая кислота служит своеобразным «фильтром», через который проходят в первую очередь маленькие молекулы, обладающие сигнальными свойствами.

Регуляторная роль гиалуроновой кислоты реализуется и через ее способность специфически связываться с целым рядом белковгиаладгеринов, например со специфическими сосудистыми ICAMрецепторами и с белковыми рецепторами клеточных мембран CD 44.

Биологические свойства ГК связаны с ее размерами. Так, короткоцепочечные молекулы (400–10 000 Да) преимущественно стимулируют ангиогенез, гиалуроновая кислота с молекулярной массой 50000–100000 Да — миграцию клеток и их пролиферацию, тогда как высокомолекулярная гиалуроновая кислота оказывает противоположный эффект — подавляет ангиогенез, тормозит клеточную миграцию и пролиферацию, ингибирует продукцию интерлейкина-1p и простагландина Е. В процессе естественного метаболизма ГК проходит стадии от высокомолекулярного полимера до коротких полисахаридных фрагментов.

Не исключено, что «дробление» гиалуроновой кислоты — это еще один механизм регуляции гомеостаза, оптимизирующий миграцию и пролиферацию клеток сообразно меняющимся условиям среды.

Нами была предпринята попытка визуализации фибробластов на различных сроках биоревитализации. Динамика морфометрических показателей живых клеток, зарегистрированная с помощью витальной компьютерной морфометрии (КФМ «Цитоскан», Москва, Россия), позволила качественно и количественно оценить роль ГК в стабилизации морфофункционального состояния фибробластов.

Кастрикина И.С., Решетняк Т.М., Василенко И.А.

ОСОБЕННОСТИ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ТРОМБОЦИТАРНОГО ЗВЕНА ГЕМОСТАЗА ПРИ АНТИФОСФОЛИПИДНОМ СИНДРОМЕ ФГУ Российский геронтологический научно-клинический центр Росздрава, Москва Учреждение РАМН институт ревматологии РАМН, Москва Антифосфолипидный синдром (АФС) — симптомокомплекс, проявляющийся множественными рецидивирующими тромбозами различной локализации, патогенетически связанными с синтезом антифосфолипидных антител (аФЛ). Диагностика и своевременная оценка степени тяжести тромботических осложнений и прогнозирование рецидивирования тромбозов АФС – сложная и недостаточно разработанная проблема. Это объясняется неоднородностью патогенетических механизмов, лежащих в основе данного симптомокомплекса, отсутствием достоверных клинических и лабораторных показателей, позволяющих прогнозировать риск рецидивов тромбоза.

Цель настоящего исследования: оптимизация диагностики АФС на основе изучения морфофункционального статуса тромбоцитов периферической крови методом компьютерной фазометрии (КФМ) и данных традиционных гемостазиологических тестов.

Материалы и методы: методом витальной компьютерной фазометрии (КФМ) были исследованы живые тромбоциты периферической крови 20 соматически здоровых лиц возрасте от 16 до лет (средний возраст 31,5±3,7) и 21 пациента с антифосфолипидным синдромом аналогичного возраста (средний возраст 33,2±4,1).

Параллельно проводили традиционные гемостазиологические тесты.

Результаты: оценка средних размерных параметров циркулирующих тромбоцитов показала, что у больных с АФС по сравнению с со здоровыми донорами наблюдалось увеличение в 1,5-2 раза значений диаметра, периметра, площади и объема при низкой фазовой высоте (р< 0,05), в 1,3 раза было снижено количество тромбоцитов покоя, в 1,3 раза увеличено число активированных клеток и в 1,4 раза - дегенеративно изменнных. В периферической крови обследованных пациентов обнаружена, идентифицирована и охарактеризована субпопуляция макроформ тромбоцитов, отличающаяся по морфометрическим параметрам. Средний диаметр этих клеток составляет 5,4 ± 0,9 мкм; периметр - 18,6 ± 5,0 мкм; высота - 0,8 ± 0,3 мкм; площадь - 16,3 ± 6,3 мкм2, объем - 4,2 ± 2,2 мкм3 против нормативных значений 2,0,8 мкм; 8,2 3,4 мкм; 1,2 0,5 мкм; 4,6 2,1 мкм2; 1,8 1,3 мкм3, соответственно. У больных с первичным АФС процент гигантских тромбоцитов составил 15,6%, со вторичным – 18,1%. Внутри этой субпопуляции были выявлены две категории тромбоцитов: с высокими или низкими значениями фазовой высоты и объема при практически соизмеримых величинах диаметра, периметра и площади. При первичном АФС соотношение макротромбоцитов высокой и низкой плотности составляло 44,5% и 55,5%. и вторичном АФС (на фоне СКВ) – 34,9% и 65,1%, соответственно. Учитывая, что по мере активации клеток происходит высвобождение содержимого гранул, выявляется снижение оптической плотности и активация тромбоцита. Охарактеризованная нами субпопуляция крупных тромбоцитов с высокой оптической плотностью, вероятно, имеет более высокое содержание гранул и органелл на единицу площади, а высокий энергетический потенциал и запас гранул хранения в этих клетках позволяет предположить, что такие тромбоциты составляют резервный фонд. Крупные тромбоциты с низкой оптической плотностью, по-видимому, наоборот, имеют недостаточность гранулярного аппарата, что, с одной стороны, может быть связано с дефектом «упаковки» продуктов синтеза развивающихся мегакариоцитов в зарождающиеся гранулы; а с другой стороны, увеличение диаметра, периметра и площади этих клеток можно объяснить ускоренным образованием молодых тромбоцитов – клеток со скудным гранулярным аппаратом и широким ободком цитоплазмы, вследствии тромбоцитопении потребления.

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.