WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 11 |

НАНОЧАСТИЦЫ ВОЛЬФРАМА – ОЦЕНКА АНТИТРОМБОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ МЕТОДОМ КОМПЬЮТЕРНОЙ МОРФОМЕТРИИ Российская медицинская академия последипломного образования, Москва;

Государственная классическая академия им. Маймонида, Москва.

Препараты, содержащие наноструктурированные композиты, находят успешное применение в биологии, медицине, а также смежных областях науки и практики. Важным аспектом этой проблемы является разработка нанопрепаратов, обладающих антитромбоцитарной и антикоагулянтной активностью. Использование наночастиц, обладающих такими эффектами, может с одной стороны способствовать эффективному предотвращению тромбообразования, а с другой – лечь в основу создания антитромбогенных материалов медицинского назначения.

Целью настоящего исследования явилась оценка антитромбоцитарной активности порошков вольфрама в условиях эксперимента in vitro методом витальной компьютерной фазовоинтерференционной микроскопии.

Объектом для исследования служили тромбоциты периферической крови здоровых добровольцев. Тестировали промышленно выпускаемый вольфрам в виде порошков с размером частиц 1,2 мкм (W) и 60 нм (наноW60), последний получали плазменным методом. Готовили взвесь в среде 199, добавляли к взвеси клеток в конечной концентрации 5мг/мл и инкубировали при температуре 37°С в течение 45 минут. Контролем служили интактные клетки доноров.

Анализ морфофункционального состояния (МФС) тромбоцитов проводили методом витальной компьютерной морфометрии с использованием отечественного фазово-интерференционного комплекса «Цитоскан»: изучали оптико-геометрические (D – диаметр, P – периметр, H – высота, A – площадь, V – объем) показатели отдельных клеток, структуру циркулирующей популяции, морфологические типы тромбоцитов. Статистический анализ данных проводили с помощью алгоритмов среды MatLab и математического пакета "Statistica 6".

Стандартная обработка выборок включала подсчет значений средних арифметических величин, величины дисперсии, среднего квадратичного отклонения и анализа асимметричности распределения. Различия между сравниваемыми группами рассчитывали по критериям Вилкоксона-МаннаУитни или Стъюдента. Уровень значимости устанавливался равным 0,05.

В процессе работы выделяли 4 морфологических типа циркулирующих клеток, характеризующих различную степень их функциональной активности: формы покоя, тромбоциты с низким уровнем активности, высоко активированные тромбоциты и дегенеративноизмененные клетки. Установлено, что в группе интактных тромбоцитов, инкубированных с физиологическим раствором в течение 45 минут, средние размерные показатели составляли 3,0±1,0 мкм, 9,7±3,9 мкм, 1,2±0,5мкм, 5,3±3,7мкм2, 1,9±1,3мкм3, D, P, H, A, V, соответственно (M±).

При этом в популяции 42% идентифицировались как клетки покоя, 26% и 24% тромбоциты с низким и высоким уровнем активности, 8% - дегенеративных клеток (нормативные значения составляют 62%, 24%, 12%, 4%). Действие порошка W проявилось в изменении морфометрических параметров тромбоцитов: 3,0±0,9 мкм, 9,2±2,9 мкм, 1,0±0,4мкм, 5,0±2,9мкм2, 1,8±1,1мкм3, D, P, H, A, V, соответственно.

Морфологический состав популяции тромбоцитов был следующим:

тромбоциты покоя – 56%, низко активированные – 36%, высоко активированные – 6%, дегенеративные – 2%. В пробе с нано-W60 - 3,1±1,мкм, 9,6±3,8 мкм, 1,0±0,4мкм, 5,4±3,9мкм2, 1,9±1,4мкм3. Морфологические типы тромбоцитов – 56%, 26%, 10%, 8%, соответственно.

Полученные нами результаты оказались неоднозначными. В то же время следует признать, что порошки вольфрама, как W, так и нано-W60, способны оказывать стабилизирующее действие на динамику морфометрических показателей таких высоко реактивных и возбудимых цитообъектов как тромбоциты. Длительная инкубация интактных тромбоцитов способствовала повышению их функциональной активности, в то время как под действием препаратов вольфрама уровень функциональной активности клеток приближался к нормальным значениям.

Представленные данные позволяют считать перспективными дальнейшие исследования в этом направлении. Поиск эффективных нанокомпозитов, сочетающих высокую антикоагулянтную и антитромбоцитарную активность, может стать основой для создания остро необходимых в медицинской практике наноструктурированных материалов с антитромбогенным покрытием.

Векшин Н.Л.

МЕТОДИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ КЛЕТОЧНОЙ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ Институт Биофизики клетки, Пущино В биологических структурах поглощение света приводит к тем же процессам трансформации энергии, что и в молекулярных растворах:

колебательной релаксации, внутренней конверсии, переносу энергии электронного возбуждения, образованию эксиплексов, флуоресценции и др. Обычно представления молекулярной флуоресцентной спектроскопии растворов автоматически переносятся на биомембраны и клетки. Часто это оправдано. Однако гетерогенность, анизотропия, упорядоченность, относительно высокая жесткость и некоторые другие свойства биомембран и клеток могут приводить к необычным соотношениям между различными каналами трансформации энергии электронного возбуждения, к неожиданным спектральным эффектам. Изучение процессов, происходящих при поглощении фотонов в биоструктурах, является существенным для понимания физических механизмов этих процессов и их специфики в гетерогенных, анизотропных, жестких структурах.

В ИБК РАН в течение длительного времени проводились исследования особенностей трансформации энергии фотовозбуждения в биомембранах и клетках животных. Был обнаружен ряд необычных спектральных эффектов и дана их интерпретация.

1) Упорядоченное расположение хромофоров в макромолекулах, мембранах и клетках может приводить к возникновению экранировочного гипохромизма, обусловленного конкуренцией хромофоров за фотон.

2) Скопление хромофоров в малом объеме мембранных и клеточных структур может приводить (за счет высокой оптической плотности в каждой отдельной частице) к микроэкранировке и микрореабсорбции света, вызывающим снижение интенсивности и искажение формы спектров возбуждения и излучения.

3) В тонких оптических слоях и капиллярах, куда помещаются клетки для детекции их флуоресценции, имеет место эффект объемной реабсорбции, заключающийся в дополнительном возгорании флуоресценции акцептора при перепоглощении донорного излучения в объеме светового пятна.

4) В биомембранах и клетках снижение степени поляризации триптофановой и зондовой флуоресценции в "красной" области спектра обусловлено возрастанием вращательной подвижности из-за увеличения времени жизни возбужденного состояния, а увеличение времени жизни вызвано ростом вклада долгоживущей эксиплексной компоненты; сами компоненты являются константами.

5) При фотовозбуждении хромофоров в вязком микроокружении возникает вынужденная подвижность, обнаруживаемая для белков и флуоресцентных зондов в наносекундной области.

6) Перекрывание спектров флуоресценции и поглощения хромофоров не обязательно ведет к переносу энергии. Величина такого переноса резко снижена за счет конкурирующих процессов тушения – динамической дезактивации, образования эксиплексов и др. В мембранах и клетках перенос энергии происходит эффективно лишь на малых расстояниях, соизмеримых с размерами хромофоров, и не описывается ферстеровской моделью.

7) При фотовозбуждении объектов, сорбированных на поверхности, может происходить их десорбция в раствор. Это показано как на молекулярных кластерах 7-амино-актиномицина с кофеином, так и на митохондриях, помещенных на кварцевую пластинку.

Власова Е.А.1, Василенко И.А.1, Самойленко В.В.2, Суслов В.П.ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ФРАКСИПАРИНА НА СОСУДИСТОТРОМБОЦИТАРИНОЕ ЗВЕНО ГЕМОСТАЗА ФГУ РГНКЦ Росздрава, Москва МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва Известно, что у больных с хронической почечной недостаточностью (ХПН), получающих лечение программным гемодиализом (ГД), имеются нарушения сосудисто-тромбоцитарного гемостаза, регуляции коагуляционной и фибринолитической систем, которые могут приводить к тромботическим или геморрагическим осложнениям. Стандартным методом устранения тромботических нарушений является использование гепарина, пероральных антикоагулянтов и аспирина. На сегодняшний день традиционными антикоагулянтами являются при ГД нефракционированный гепарин (НФГ) и низкомолекулярные гепарины (НМГ). Несмотря на многочисленные исследования, механизмы действия данных препаратов до сих пор остаются не до конца понятными. Цель настоящей работы оценить влияние НФГ и НМГ (фраксипарин) на морфофункциональное состояние живых тромбоцитов, спонтанную, АДФ, коллаген- и ристомицин индуцированную агрегацию тромбоцитов до и после проведения гемодиализа у больных с ХПН.

Были обследованы 30 условно здоровых добровольцев (контрольная группа) и 45 пациентов с ХПН до и после проведения заместительной процедуры.

Морфофункциональное состояние тромбоцитов периферической крови определяли с помощью метода витальной компьютерной морфометрии на основе отечественного фазово-интерференционного микроскопа «Цитоскан». Параллельно измеряли и сравнивали спонтанную, АДФ-, коллаген- и ристомицин индуцированную агрегацию тромбоцитов.

При описании, измерении и количественном анализе тромбоцитов основное внимание было сконцентрировано на размерных параметрах фазовых изображений живых клеток и их структурно-объемных особенностях. Результаты исследований показали, что у больных с ХПН, которые использовали НФГ, после процедуры ГД средние в популяции размерные показатели тромбоцитов составили диаметр - 3,1 0,8 mkm;

периметра - 9,2 2,8 mkm; высота - 0,96 0,3 mkm; площадь - 5,7 3,2 mkm2 и объем 2,2 1,4 mkm3 (p<0,05) против нормативных значений 2,6 0,8 мкм;

8,2 3,4 мкм; 1,2 0,5 мкм; 4,6 2,1 мкм2; 1,8 1,3 мкм3, соответственно.

Нами идентифицировано 4 типа тромбоцитов, характеризующих ту или иную степень их активации. Основой для дискриминации структурно измененных клеток послужили различные варианты формы, характер рельефа их поверхности, наличие псевдоподий, их количество и величина.

К I типу относили плоские дискоциты – клетки «покоя». II морфологический тип тромбоцитов был представлен дискоидными клетками с 1–3 короткими (меньше диаметра клетки) отросткамипсевдоподиями, являющимися выростами мембраны – тромбоциты с низким уровнем активности. Клетки, имеющие около 2-5 длинных (больше диаметра клетки) отростков-«антенн», представляли III тип и отличались большим многообразием форм: от плоских дисков до клеток неправильной причудливой формы – высоко активированные тромбоциты.

Дегенеративно-измененные клетки неправильной формы с неровной бугристой поверхностью и большим количеством отростков различной длины были отнесены к IV морфологическому типу. Процентное содержание морфологических типов клеток у больных с ХПН составило 52,3%; 36,6%; 10,3%; 0,8%, против нормативных значений 59%; 28%; 11%;

2%, соответственно.

У пациентов с ХПН, которые использовали фраксипарин (надропарин), после ГД размеры тромбоцитов составили 2,7 0,6 mkm;

8,1 2,0 mkm; 1,1 0,4 mkm; 4,3 2,0 mkm2; 1,9 1,1 mkm3 (p<0,05);

содержание различных морфологических типов оказалось I – 57,2%; II – 33,5%; III – 9,3%; IV – 0,5%. У больных с ХПН, которые использовали НФГ, спонтанная и адреналин - индуцированная агрегация тромбоцитов после ГД были увеличены на 15-50% по отношению к контрольной группе;

показатели АДФ- и коллаген- индуцированной агрегации - снижены на 1016,8%; ристомицин-индуцированная агрегация тромбоцитов оставалась в пределах нормы. При использовании надропарина у пациентов с ХПН спонтанная-, адреналин- и АДФ- индуцированная агрегация тромбоцитов были сопоставимы с данными контрольной группы; ристомицининдуцированная агрегация тромбоцитов незначительно увеличена;

коллаген-индуцированная агрегация тромбоцитов была снижена на 20%.

По нашему мнению, компьютерная морфометрия живых тромбоцитов гарантирует быстрый и объективный анализ сосудистотромбоцитарного гемостаза, показывая ранние появления осложнений тромбоцитов у больных с ХПН. Одноразовое введение фраксипарина обеспечивает эффективность в течение проведения программного ГД и удобство в использовании. Несмотря на то, что НФГ остается «золотым стандартом» лечения у пациентов с ХПН, наши результаты показали, что НМГ являются более безопасными и эффективными по сравнению НФГ.

Однако из-за выведения НМГ почками, данным пациентам необходимо проводить регулярный контроль гемостазиологических показателей.

Власова Е.А., Селиваненко В.Т., Шпак И.И.

МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ТРОМБОЦИТОВ В ОЦЕНКЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ПОЛНОЦЕННОСТИ КОНЦЕНТРАТА ТРОМБОЦИТОВ МОНИКИ им. М.Ф.Владимирского, Москва Трансфузии концентрата тромбоцитов (КТ) имеют важное значение в клинической практике как эффективный метод лечения и профилактики геморрагических осложнений, обусловленных снижением числа тромбоцитов в периферической крови (тромбоцитопения) или их дисфункцией (тромбоцитопатия). Известно, что хранение КТ связано с определенными изменениями, приводящими к нарушению обменных процессов в клетках с последующим снижением их функциональной полноценности.

Цель настоящей работы – оценить морфофункциональную полноценность тромбоцитов КТ с использованием экспресс-метода витальной компьютерной фазовой морфометрии.

Были обследованы 15 условно здоровых добровольцев (контрольная группа), 5 пациентов с патологией клапанного аппарата из кардиохирургического отделения МОНИКИ им.М.Ф.Владимирского, образцов КТ. Морфофункциональное состояние тромбоцитов доноров, пациентов и КТ определяли с помощью метода витальной компьютерной морфометрии на основе отечественного фазово-интерференционного микроскопа «Цитоскан».

Установлено, что средние размерные показатели тромбоцитов КТ составили: диаметр - 3,1 1,2 mkm; периметра - 9,5 4,4 mkm; высота – 1,0 0,4 mkm; площадь - 5,8 4,5 mkm2 и объем 2,1 1,4 mkm3 (p<0,05) против нормативных значений 2,8 0,8 мкм; 8,3 3,4 мкм; 1,1 0,5 мкм;

4,8 2,1 мкм2; 1,9 1,3 мкм3, соответственно (группа контроля). Уровень функциональной активности тромбоцитов определяли на основании подсчета различных морфологических типов: клетки «покоя» (I тип), тромбоциты с низким уровнем активности (II морфологический тип), высоко активированные тромбоциты (III тип) и дегенеративно-измененные клетки (IV морфологический тип). Основой для дискриминации структурно измененных клеток служили различные варианты формы, характер рельефа их поверхности, наличие псевдоподий, их количество и величина. Процентное содержание морфологических типов клеток в КТ оказалось 56,7%; 26,2%; 14,1%; 3,0%, против нормативных значений 59%;

28%; 11%; 2%, соответственно.

После трансфузий КТ у обследованных больных были проанализированы морфометрические показатели тромбоцитов циркулирующей крови. Данные КФМ показали, что диаметр и периметр клеток сохранялись пределах нормы, высота и площадь были снижены на 6-9%, а объем незначительно увеличен. Содержание клеток покоя составило 66,5%, активированных тромбоцитов (28,5 и 4%), дегенеративных – 1%.

Полученные нами пилотные результаты позволяют предполагать перспективность дальнейших исследований в этом направлении.

Компьютерная морфометрия гарантирует быстрый и объективный анализ особенностей морфологии и функциональной полноценности живых тромбоцитов. Использование метода для оценки качества КТ и лечебной эффективности тромбоцитотерапии может найти широкое применение в медицинской практике.

Волченко Н.Н., Славнова Е.Н., Тычинский В.П., Решетов И.Н., Вышенская Т.В., Сухарев С.С., Клемешов И.В.

ПРИМЕНЕНИЕ АТОМНО-СИЛОВОЙ И КОГЕРЕНТНОЙ ФАЗОВОЙ МИКРОСКОПИИ В ДИАГНОСТИКЕ РАКА ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.

ФГУ «МНИОИ им.П.А.Герцена Росмедтехнологий», Москва Московский институт радиоэлектроники и автоматики, Москва ФГОУ ИПК ФМБА России, Москва Цель настоящего исследования - изучение возможностей новых методов микроскопии: метода когерентной фазовой микроскопии и атомно-силовой микроскопии в диагностике папиллярного рака щитовидной железы.

Материалом для исследования послужили соскобы с опухолей и окружающих тканей щитовидной железы, полученных от 19 больных папиллярным раком щитовидной железы. Для анализа морфологии и прижизненной динамики клеток использовали когерентный фазовый микроскоп (КФМ «Эйрискан»). Для анализа микрорельефа поверхностей клеток использовали использовался исследовательский комплекс Интеграна основе Атомно-Силового микроскопа (АСМ) производства «ЗАО НТ НДТ» (г.Зеленоград, Россия).

Использование нового метода КФМ позволило обнаружить различия между нормальными клетками и клетками рака в фазовых изображениях, а также в спектрах флуктуации фазовой толщины, отражающих функциональное состояние клетки.

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.