WWW.DISSERS.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

   Добро пожаловать!


Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 11 |
1 МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ МОСКОВСКИЙ ОБЛАСТНОЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ КЛИНИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ им. М.Ф.ВЛАДИМИРСКОГО (МОНИКИ) ФГУ РОССИЙСКИЙ ГЕРОНТОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНО-КЛИНИЧЕСКИЙ ЦЕНТР РОСЗДРАВА РОССИЙСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ПОСЛЕДИПЛОМНОГО ОБРАЗОВАНИЯ (РМАПО) Материалы II Московской региональной научно-практической конференции (c международным участием) ЦИТОМОРФОМЕТРИЯ В МЕДИЦИНЕ И БИОЛОГИИ:

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ АСПЕКТЫ Москва 28 – 29 мая 2009 года 2 Ни одно человеческое исследование не может называться истинной наукой, если оно не прошло через математические доказательства Леонардо да Винчи Уважаемые коллеги! Древнее изречение «кто хорошо диагностирует, тот хорошо лечит» продолжает оставаться базой современной медицины.

Диагностика (распознавание) – сложный процесс познания сущности патологических процессов, состояний и болезней, в котором важную роль играют результаты морфологического исследования.

Исследования, основанные на количественной оценке любых признаков патологического процесса, дают возможность отбирать для научной и практической деятельности только те результаты, которые обладают наибольшей надежностью и дают представление о возможной ошибке исследования. Кроме того, полученные данные имеют определенную точность, т.е. высокую степень приближения к истинным значениям, а также достаточную достоверность.

Повышение качества исследовательской и практической деятельности – настоятельное требование времени, главное условие научно-технического прогресса в медицине и биологии.

Заслуженный деятель науки РФ, академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор Г.Г.АВТАНДИЛОВ 3 Автандилов Г.Г.

МОРФОМЕТРИЯ В РАЗВИТИИ ДОКАЗАТЕЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ АНАТОМИИ ГОУ ДПО РМАПО Росздрава Успехи развития диагностики различных заболеваний, осуществляемых на базе новейших достижений науки, предъявляют к современной патологической анатомии повышенные требования при проведении секционных и биопсийных исследований, направленных на углубление информации об изучаемых патологических процессах.

Традиционный описательный подход к документации обнаруживаемых патоморфологических изменений, в ряде случаев, плохо сопоставим с результатами прижизненных инструментальных исследований и требует внесения в протокол вскрытия ряда дополнительных морфометрических и других данных, уточняющих трактовку и заключения прозектора.

Рассмотрим в качестве примера возможности патологоанатома при решении вопросов, связанных с уточнением степени выраженности атеросклеротического процесса в аорте и магистральных артериях сердца.

С помощью планиметрических линеек установлена динамика изменений площадей липидных пятен, фиброзных бляшек, «осложненных поражений» и участков кальциноза в аорте и венечных артериях сердца.

Показано, что каждое прожитое десятилетие после сорока лет почти удваивает общую площадь атеросклеротических поражений.

При изучении ишемической болезни сердца следует провести вскрытие сердца без пересечения венечных артерий, измерить виды атеросклеротических изменений интимы и их площадь, определить степень стенозирования коронарных артерий.

Для ретроспективной оценки характера прижизненного кровоснабжения сердца при наличии стенозов артерий, измеряют в этих отделах периметры продольно вскрытых сосудов над местом стеноза просвета и в его суженном месте. Затем, по отношению значений квадратов этих двух периметров, устанавливают степень стенозирования каждой коронарной артерии. На основании полученных данных вычисляют средний групповой показатель снижения общего коронарного кровотока. Указанный коэффициент относят к общей массе сердца или миокарда и получают общую информацию о степени ишемизации сердца и миокарда (отметим, что при выполнении поперечных сечений артерий, степень их стенозирования устанавливают стереометрически). Отметим очень важное условие для возникновения ишемизации миокарда, которое связано с тем, что объемный кровоток в каждой артерии, имеющей стеноз, согласно законам гемодинамики уменьшается пропорционально четвертой степени радиуса просвета сосуда. Поэтому сужение просвета одной, двух или сразу трех магистральных артерий сердца, серьезно снижает суммарный объем циркулирующей крови в миокарде. Так, даже при сохранении одной трети просвета в трех коронарных артериях сердца, общий объемный кровоток уже не превышает 8-и процентов от требуемого количества крови для нормального функционирования миокарда, зачастую создавая фон для наступления внезапной сердечной смерти «практически здорового» человека. Отметим, что такие же явления наблюдаются при стенозирующем атеросклерозе магистральных артерий и в других органах.

Следующим этапом морфометрической оценки ишемии миокарда является стереометрическая оценка гистологических срезов сердечной мышцы с помощью точечного счета. Определение соотношений между объемными долями кардиомиоцитов и соединительнотканной стромы миокарда дает возможность судить о снижении процессов ультрациркуляции метаболитов между стенками капилляров и кардиомиоцитов, что является важным показателем хронической ишемизации миокарда.

Вторым примером применения морфометрии является использование гисто плоидометрического метода для изучения стадий канцерогенеза.

Установлено, что средние показатели плоидности ядер клеток ростковых зон опухоли точнее выявляют принадлежность исследуемого клона клеток к определенной стадии канцерогенеза, чем обычные методы исследования морфологического среза ткани или же мазков, содержащих клетки опухоли.

Выявленное увеличение количества ДНК в ядрах клеток по мере нарастания стадий развития новообразований математически описывается функциональной зависимостью между стадией (временем развития) и качественным признаком – показателями средней плоидности ядер клеток определенной стадии развития новообразования: y = N + xc, где у – средняя плоидность ядер клеток определенной стадии канцерогенеза, N – средний показатель плоидности ядер клеток исходной, нормальной ткани, с – единица плоидности, x – порядковый номер ступени канцерогенеза, имеющий определенный доминирующий клон клеток, которые приобрели новые биологические свойства. Представленная математическая модель корректно описывает особенности опухолевой прогрессии, которая установлена нами при исследованиях опухолевого биопсийного и операционного материала. Подтверждение гипотезы эмпирическими данными позволило установить ранее неизвестную закономерность ступенчатой стадийности развития новообразований человека, заключающаяся в том, что «последовательное увеличение содержание ДНК в ядрах клеток на одну единицу плоидности ведет к появлению новых биологических качеств этих новообразований, измеряемых числом единиц, превышающих показатели плоидности ядер нормальных клеток («код злокачественности») - закономерность Автандилова» (Диплом № на открытие от 27 января 2006 г.).

Широкое применение морфометрических методов исследований существенно повысит доказательную базу патологической анатомии болезней и опухолей, улучшит качество клинико-анатомических сопоставлений.

Автандилов Г.Г., Виссарионов В.А., Червонная Л.В., Ильина Е.Э.

КОМПЬЮТЕРНАЯ ПЛОИДОМЕТРИЯ В ДИАГНОСТИКЕ МЕЛАНОЦИТАРНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ КОЖИ Российская медицинская академия последипломного образования, Москва;

Институт пластической хирургии и косметологии, Москва.

Среди разнообразных доброкачественных пигментобразующих опухолей кожи – невусов, одни имеют доброкачественное развитие и с возрастом приобретают склонность к инволюции, другие – диспластический невус – относятся к предмеланомным новообразованиям, на фоне которых в ряде случаев может возникать злокачественная меланома.

Дифференциальная диагностика диспластического невуса и минимальной меланомы основывается на характерных клинических и гистологических признаках этих новообразований, но иногда в практической деятельности морфолога возникают трудности при их дифференциальной диагностике. В этих случаях необходимы более тонкие, объективные методы, к которым можно отнести морфометрические исследования. Известно, что нарушения созревания клеток при дисплазии и при злокачественной их трансформации связаны с количественными изменениями ДНК в ядрах клеток, отражающими биологические особенности клеток и их морфо-функциональные характеристики. Объективизация дифференциальной диагностики основана на исследовании количественных изменений ДНК ядер опухолевых клеток, при этом визуализируется плоидность и по ее характеристикам можно дифференцировать злокачественные и доброкачественные новообразования.

Диагностическая плоидометрия, разработана на кафедре патологической анатомии РМАПО. При использовании компьютерной микроскопии установлено, что для простого невуса средние показатели плоидности равны 2,5с (доброкачественное новообразование); для диспластического невуса (предзлокачественная опухоль) характерна плоидность 4,1с, а при злокачественной меланоме средние показатели плоидности ядер доминирующих клонов выше предзлокачественного опухолевого процесса диспластического невуса и равняются -5,94с.

Эти данные можно расценивать как важные дополнительные диагностические критерии при дифференциальной гистологической диагностике указанных вариантов меланоцитарных новообразований кожи, которыми не располагают патологоанатомы при классическом гистологическом исследовании опухолей. Результаты плоидометрического исследования в значительной степени повышают точность морфологических заключений, обоснованность и адекватность лечебных мероприятии.

Таким образом, результаты плоидометрии, позволяющие уточнить биологические особенности невоцитов, диспластических и злокачественных меланоцитов пигментобразующих новообразований кожи, могут быть использованы в качестве дополнительных, объективных дифференциально-диагностических критериев, снижающих субъективизм патологоанатома при гистологической диагностике доброкачественных, предзлокачественных и злокачественных меланоцитарных опухолей кожи человека.

Артмов Д.В., Метелин В.Б.

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ПРОЦЕДУРЫ ПРОГРАММНОГО ГЕМОДИАЛИЗА НА ПОДВИЖНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ МЕТОДОМ ЗНАКОПЕРЕМЕННОГО МИКРОЭЛЕКТРОФОРЕЗА Государственная классическая академия имени Маймонида, Москва Разработка методов экспресс - диагностики нарушений морфофункционального состояния клеток макроорганизма при различных патологических процессах является актуальной проблемой современной медицины. В этом плане широкие возможности комплекса «ЦитоЭксперт» (Научно-техническое учреждение «Инженерно-технический центр» ОАО «Аксион-Холдинг» г. Ижевск) чрезвычайно привлекательны для специалистов-клиницистов и сотрудников исследовательских лабораторий. Данный комплекс по сравнению с импортными аналогами («Пармаквант» (Германия), «Оптон») более информативен, прост в использовании, экономичен в эксплуатации и обслуживании. Кроме того, наряду с возможностью замера среднего заряда изучаемых цитообъектов, построения гистограмм по зарядам и доли подвижных клеток относительно их общего числа имеется возможность определения размеров, морфологии и степени агрегации живых функционирующих клеток.

Целью настоящей работы явилась оценка нарушений биофизических параметров нейтрофилов как эффекторных клеток неспецифического иммунитета у больных с хронической почечной недостаточностью (ХПН) до и после проведения процедуры программного гемодиализа.

Объектом исследования служили нейтрофилы периферической крови 10 практически здоровых людей и 10 пациентов с ХПН до и после проведения процедуры программного гемодиализа.

Клетки выделяли стандартным способом на градиенте плотности (1,119г/мл), суспензировали в 0,3М растворе сахарозы. Полученный субстрат помещали на поверхность рабочей камеры для цитологического микроэлектрофореза, накрывали покровным стеклом и исследовали под микроскопом при комнатной температуре с увеличением объектива х20 в течение 10-15 минут, подвергая клетки воздействию знакопеременного электрического поля с величиной тока не более 2,0 мА и частотой смены знака 0,25 Гц. С помощью микроскопа в 3-5 полях зрения у 15-нейтрофилов, совершающих колебания вдоль направления этого поля, измеряли амплитуду колебаний, с последующим усреднением полученных данных. На основе показателей средней амплитуды колебаний судили о морфофункциональных особенностях нейтрофилов, определяя, таким образом, уровень активности неспецифического иммунитета.

При исследовании нейтрофилов периферической крови пациентов с ХПН до и после проведения процедуры программного гемодиализа были получены следующие данные: до проведения процедуры программного гемодиализа отмечалась низкая электрофоретическая подвижность фагоцитов,а после процедуры программного гемодиализа - увеличение их подвижности, повышение процента активных форм нейтрофилов.

Полученные результаты позволили сделать вывод о возможности использования метода аналитического микроэлектрофореза для оценки состояния неспецифической резистентности организма.

Боровкова Н.В., Перцев А.С., Рей С.И., Ильинский М.Е., Хватов В.Б.

ИССЛЕДОВАНИЕ АПОПТОЗА ЛИМФОЦИТОВ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ У БОЛЬНЫХ С ПОЛИОРГАННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского, Москва В работах последних лет большое значение уделяется исследованию апоптоза клеток для оценки тяжести состояния больного, прогнозирования течения и исхода заболевания. Патогенетическим звеном, приводящим к смерти больного при неотложных состояниях, является синдром полиорганной недостаточности (ПОН), в основе которого лежит массивная гибель клеток жизненноважных органов и лимфоцитов путем апоптоза.

Цель: исследование апоптоза иммунокомпетентных клеток для оценки полиорганной недостаточности у хирургических больных с ПОН.

Материалы и методы. Обследовано 19 больных (основная группа) с острыми хирургическими заболеваниями, осложненными развитием ПОН, проходивших лечение в НИИ им. Н.В.Склифосовского с 2006 по 2009гг.

Тяжесть органной дисфункции оценивали по шкале SOFA. Контрольную группу составили 9 пациентов с острой хирургической патологией, без признаков ПОН. Для определения физиологической нормы обследовали первичных доноров крови. Исследование апоптоза мононуклеаров и подсчет погибших лейкоцитов крови проводили с помощью проточной цитометрии. Оценку количества лимфоцитов, готовых к апоптозу, оценивали по экспрессии Fas-рецептора с помощью моноклональных антител CD95. Относительное количество мононуклеаров венозной крови, вступивших в апоптоз, определяли с помощью Annexin V.

Результаты и обсуждение. На момент исследования, тяжесть органной дисфункции у больных основной группы составила 7,0±0,балла, при 1,0±0,5 в контрольной группе. Содержание CD 95+ лимфоцитов варьировало в широких пределах от 11,1 до 76,1 % и в среднем составляло 47,4±4% при норме 44,5±3,0%. Установлено, что в 8 случаях содержание СD95+лимфоцитов соответствовало физиологической норме. Это мы связываем с адекватным ответом иммунной системы на повреждение и/или инфекцию. У 6 больных выявлено увеличение (на 50,6 %) количества CD95+лимфоцитов в венозной крови (67,0±5,2%). Это свидетельствовало об активации лимфоцитов крови и готовности клеток к запуску апоптоза, при получении соответствующего сигнала. У 5 больных количество CD95+лимфоцитов в венозной крови уменьшалось на 43 % (25,0±1,5 %).

Снижение содержания лимфоцитов, экспрессирующих Fas-рецептор, мы связываем с уже произошедшей гибелью части клеток. У пациентов контрольной группы содержание лимфоцитов, экспрессирующих FASрецептор было сопоставимо с физиологической нормой.

Исследование апоптоза мононуклеаров периферической крови у больных ПОН выявило достоверное увеличение количества клеток вступающих в апоптоз до 9,17±1,3%, что более чем в четыре раза превышает физиологическую норму. В контрольной группе также наблюдалось повышение количества апоптотических лимфоцитов до 4,3±0,6% при норме 2,2±0,25%. При дальнейшем анализе выявлена прямая достоверная корреляция (коэф.корр.=0,43 при р=0,03) между содержанием мононуклеаров, вступающих в апоптоз и тяжестью полиорганной дисфункции, оцениваемой по шкале SOFA. Построение регрессионной модели Кокса выявило, что увеличение содержания в венозной крови апоптотических клеток достоверно повышает риск смерти у больных с ПОН (OR = 1,667±0,043).

Таким образом, исследование апоптоза мононуклеаров у больных с полиорганной недостаточностью, коррелирует с тяжестью органной дисфункции, что позволяет прогнозировать течение и исход заболевания.

Василенко И.А., Кастрикина И.С., Метелин В.Б., Щербакова Э.Г., Баранов В.И.

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 11 |






© 2011 www.dissers.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.